[發明專利]對伯氏疏螺旋體的新型抗病毒活性的鑒定

在審

• 申請號: 201580037580.4
• 申請日: 2015-04-02
• 公開（公告）號: CN107148480A
• 公開（公告）日: 2017-09-08
• 發明（設計）人: 張穎;馮杰
• 申請（專利權）人: 張穎;張文宏
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;G01N21/25;G01N21/64;G01N33/50;A61K31/00;A61K38/00
• 代理公司: 上海申新律師事務所31272
• 代理人: 董科

1.一種用于評估來自疏螺旋體屬的細菌的生存力的方法，所述方法包括：

(a)建立細菌培養物，其包含從疏螺旋體屬分離的細菌；

(b)用染色混合物孵育細菌培養物，所述染色混合物包含：(i)第一試劑，其發射第一顏色的熒光，指示培養物里的活細菌細胞，和(ii)第二試劑，其發射與第一顏色形成對比的第二顏色的熒光，并且指示培養物里的死亡的細菌細胞；

(c)計算第一顏色的發射熒光強度與第二顏色的發射熒光強度的比值；并且(d)評估培養物里的細菌的生存力，其中，(c)中所計算出的比值指示培養物里的活細菌的百分比。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一顏色是綠色，而所述第二顏色是紅色或橙色。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，第一熒光試劑是SYBR Green I，并且第二熒光試劑是碘化丙啶。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，SYBR Green I以約0.1x至約100x的濃度存在于培養物中，并且碘化丙啶以約0.1mM至約5mM的濃度存在于培養物中。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，培養物中的SYBR Green I的濃度為10x，并且碘化丙啶的濃度為2mM。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述培養物還包含BSK-H培養基。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，將培養物與混合物一起孵育的步驟進行約15分鐘。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，孵育的步驟在黑暗中進行。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述細菌為伯氏疏螺旋體。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，所述伯氏疏螺旋體包含選自以下組的形態形式：螺旋形式，原生質球形式，囊性或圓體形式，生物膜樣和生物膜形式，以及它們的組合。

11.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法以高通量方式實施。

12.根據權利要求11所述的方法，其特征在于，所述高通量方式使用至少一種多孔微板。

13.根據權利要求12所述的方法，其特征在于，所述多孔微板包括96孔板。

14.一種用于評估來自疏螺旋體屬的細菌對至少一種抗生素的敏感性的方法，所述方法包括：

(a)建立細菌培養物，其包含從疏螺旋體屬分離的細菌；

(b)在適于細菌生長的條件下孵育所述培養物，采用：

(i)至少一個劑量的至少一種抗微生物劑；和

(ii)染色混合物，包含：第一試劑，其發射第一顏色的熒光，指示培養物內的活細菌，和第二試劑，其發射與第一顏色形成對比的第二顏色的熒光，并且指示培養物內的死細菌；其中，第一顏色的發射熒光強度與第二顏色的發射熒光強度的比值指示培養物內活細菌的百分比；以及

(c)在暴露于至少一個劑量的至少一種抗微生物劑的一段時間后通過計算(b)(ii)中的比值來評估來自疏螺旋體屬的細菌對至少一種抗生素的敏感性，其中，如果(b)(ii)中的比值在暴露于至少一個劑量的至少一種抗生素的一段時間之后保持相同或降低，那么所述細菌被評估為對至少一種抗生素是敏感的，并且，如果(b)中的比值在暴露于至少一個劑量的至少一種抗生素的該段時間之后增加了，那么所述細菌被評估為對至少一種抗生素是抗性的。

15.根據權利要求14所述的方法，其特征在于，還包括：確定對于所述至少一種抗生素的最小抑制濃度中斷點。

16.根據權利要求14所述的方法，其特征在于，第一顏色是綠色，第二顏色是紅色或橙色。

17.根據權利要求14所述的方法，其特征在于，第一熒光試劑是SYBR Green I，并且第二熒光試劑是碘化丙啶。

18.根據權利要求14所述的方法，其特征在于，培養物中的SYBR Green I的濃度為10x，并且碘化丙啶的濃度為2mM。

19.根據權利要求14所述的方法，其特征在于，所述培養物還包含BSK-H培養基。