[實用新型]一種純化小鼠IgM類單克隆抗體的試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201520581391.0
• 申請日: 2015-08-05
• 公開（公告）號: CN205088168U
• 公開（公告）日: 2016-03-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張蜜
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢三鷹生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K1/16
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本實用新型涉及生物大分子分離領(lǐng)域，具體地是從小鼠腹水中純化IgM類單克隆抗體。

背景技術(shù)

與IgG類單克隆抗體不同，小鼠IgM類單克隆抗體不能與蛋白A或蛋白G結(jié)合，因此不能像IgG類單克隆抗體那樣通過蛋白A或蛋白G進行親和純化。通常可以采用嗜硫法對小鼠IgM類單克隆抗體進行純化，其原理是：在銨離子的存在下，小鼠IgM類單克隆抗體帶大量負(fù)電，可以與嗜硫填料(固定化的β-巰基吡啶)進行結(jié)合，當(dāng)去除銨離子時由于小鼠IgM類單克隆抗體呈電中性而從填料上脫落，從而得到具有天然活性的高純度抗體。然而整個流程周期較長，并且所需的試劑配置復(fù)雜，市場上尚無此類試劑盒，因此給抗體純化工作人員帶來不便。

實用新型內(nèi)容

本實用新型的目的在于提供一種試劑盒，含有純化小鼠IgM類單克隆抗體的全部試劑和工具。

一種純化小鼠IgM類單克隆抗體的試劑盒，包括盒體(1)和固定于泡沫塑料模具(2)上的4瓶液體試劑，1個嗜硫?qū)游鲋?7)，和1份說明書組成，4瓶液體試劑分別為2倍濃縮結(jié)合緩沖液(3)、純水(4)、洗脫液(5)、考馬斯亮藍(lán)顯色劑(6)。2倍濃縮結(jié)合緩沖液(3)一瓶60ml用帶蓋白色PE塑料瓶裝，純水(4)一瓶40ml用帶蓋白色PE塑料瓶裝，洗脫液(5)一瓶20ml用帶蓋白色PE塑料瓶裝，考馬斯亮藍(lán)顯色劑(6)一瓶5ml用帶蓋棕色PE塑料瓶裝。

嗜硫?qū)游鲋?7)是由3ml嗜硫純化填料和10ml結(jié)合緩沖液工作液組成，放于泡沫塑料模具(2)中。所述的泡沫塑料模具(2)，位于盒體(1)內(nèi)，它包含凹位一(8)，凹位二(9)，凹位三(10)，凹位四(11)，凹位五(12)這5個凹位，其中凹位一(8)放置2倍濃縮結(jié)合緩沖液，凹位二(9)放置純水(4)，凹位三(10)放置洗脫液(5)，凹位四(11)放置考馬斯亮藍(lán)顯色劑(6)，凹位五(12)放置嗜硫?qū)游鲋?7)。

本實用新型的優(yōu)點在于：它包含小鼠IgM類的單克隆抗體純化所需的全部試劑組分，使用時操作簡單，純化得到的小鼠IgM類單克隆抗體純度高，活性損失小，回收率高，在科研和工業(yè)上進行中小規(guī)模純化小鼠IgM類單克隆抗體有很大的應(yīng)用價值。

附圖說明

圖1為本實用新型盒體(1)與固定泡沫模具(2)側(cè)視圖。

具體實施方式

一、試劑的配置與試劑盒的組裝

1.2倍濃縮結(jié)合緩沖液的配制與裝瓶：準(zhǔn)確稱量1.52gNa3PO4·12H2O、21.12g(NH4)2SO4，加純水至95ml，攪拌使其完全溶解，調(diào)節(jié)pH至7.5，加純水定容至100ml即為2倍濃縮結(jié)合緩沖液，取50ml盛裝在白色塑料瓶中并擰緊瓶蓋。另取10ml2倍濃縮結(jié)合緩沖液，加入10ml純水，得到結(jié)合緩沖液工作液。

2.洗脫液的配制與裝瓶：準(zhǔn)確稱量0.18gNaCl、0.00288gKH2PO4和0.04gNa2HPO4·12H2O，加純水至20ml，攪拌使其完全溶解并盛裝在洗脫液中并擰緊瓶蓋。

3.取一根商品化空層析柱，用純水洗滌，加入3ml商品化嗜硫純化填料(固定化的β-巰基吡啶)，棄去保護劑，再向柱內(nèi)加入10ml結(jié)合緩沖液工作液，再打開層析柱下堵帽，棄去結(jié)合緩沖液，再蓋上堵帽，重新加入10ml結(jié)合緩沖液工作液，蓋上層析柱上蓋即組成嗜硫?qū)游鲋?/p>

4.取40ml純水裝在純水中并擰緊瓶蓋；取5ml商品化考馬斯亮藍(lán)顯色劑裝在棕色瓶中擰緊瓶蓋。

5.將試劑放入對應(yīng)的凹位，其中凹位一放置2倍濃縮結(jié)合緩沖液，凹位二放置純水，凹位三放置洗脫液，凹位四放置考馬斯亮藍(lán)顯色劑，凹位五放置嗜硫?qū)游鲋?/p>

上述幾步裝瓶的試劑與層析柱放置在泡沫模具相應(yīng)位置上，再將泡沫模具放入盒體，放入說明書，蓋上盒蓋。試劑盒組裝完成。

二、試劑盒的使用

1.取確定好亞型為IgM的腹水2000g離心10min取上清計量體積，加入等體積的2倍濃縮結(jié)合緩沖液充分混合均勻。

2.取出40ml的2倍濃縮結(jié)合緩沖液，用試劑盒里的純水配置成結(jié)合緩沖液工作液，洗滌裝有填料的層析柱三次。每次用8-10ml。洗滌完畢后，將混好腹水裝入層析柱內(nèi)，做好標(biāo)記，蓋上層析柱上蓋。4℃孵育過夜。

3.將腹水從層析柱里放出，即為流穿液，單獨用干凈瓶子裝好，在瓶子上做好標(biāo)記。

4.用結(jié)合緩沖液工作液洗滌層析柱三次去掉未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。

5.待層析柱內(nèi)液體放干后，加入洗脫液洗脫抗體，每次加入1ml，用1.5ml的EP管收集洗脫下的組份。