[實(shí)用新型]綿羊肉用性能特異主效基因等位基因檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201520150321.X
• 申請日: 2015-03-17
• 公開（公告）號(hào): CN205046120U
• 公開（公告）日: 2016-02-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 閆偉;胡江;羅玉柱
• 申請（專利權(quán)）人: 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12M1/34
• 分類號(hào): C12M1/34;C12Q1/68
• 代理公司: 北京中恒高博知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11249
• 代理人: 呂玉博

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型涉及綿羊肉用性能特異主效基因等位基因檢測試劑盒。

背景技術(shù)

綿羊肉用性能(產(chǎn)肉量)是重要的經(jīng)濟(jì)性狀，檢測并選留具有優(yōu)良肉用性能的綿羊可以顯著提高養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)效益。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，利用分子遺傳學(xué)方法能夠準(zhǔn)確檢測并選留具有優(yōu)良肉用性能的綿羊。基于動(dòng)物DNA序列影響表型性狀的基本生物學(xué)原理，應(yīng)用現(xiàn)代分子遺傳學(xué)方法，尋找鑒定影響綿羊肉用性能的高效特異等位基因是評價(jià)綿羊肉用性能的有效手段之一。綿羊肉用性能(產(chǎn)肉量)是數(shù)量性狀，受微效多基因調(diào)控，也有效應(yīng)較大的主基因(Majorgene)。目前，檢測影響綿羊肉用性能的基因大多數(shù)為微效基因，而微效基因數(shù)量大且并非隨機(jī)分布，通過檢測微效基因評估綿羊肉用性能的準(zhǔn)確性不高，多個(gè)微效基因的檢測結(jié)果可能互相沖突且費(fèi)時(shí)費(fèi)力。而通過尋找和分析效應(yīng)較大的主基因DNA序列，檢測影響綿羊產(chǎn)肉性能的主基因特異等位基因，可以有效提高綿羊肉用性能評估的準(zhǔn)確性，縮短綿羊肉用性能改良進(jìn)程，進(jìn)而提高綿羊個(gè)體經(jīng)濟(jì)效益。

綿羊FABP4基因定位于9號(hào)染色體，包括4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子，其被認(rèn)為是影響肉質(zhì)性狀的主要候選基因之一。綿羊FABP4基因具有豐富的變異，而剖析各個(gè)等位基因?qū)θ庥眯阅艿挠绊懗潭扔欣陂_發(fā)DNA標(biāo)記物。

本實(shí)用新型采用的綿羊肉用性能分子標(biāo)記選種技術(shù)主要針對特異主效基因FABP4，利用PCR-SSCP技術(shù)檢測特異等位基因，然后根據(jù)檢測結(jié)果評估攜帶不同等位基因個(gè)體的肉用性能等級(jí)，從而判斷是否留做種用。上述檢測過程需要使用多種試劑，因此很需要有一種存放盒，能夠?qū)⒃噭┢考爸饕o助檢測用品集裝在一個(gè)盒中作為一個(gè)單元取用，檢測者使用時(shí)只需取一次盒即可實(shí)施操作，使用完可以存回原盒送檢，這將是很方便之舉，同時(shí)這樣也可避免造成二次污染。

實(shí)用新型內(nèi)容

本實(shí)用新型提供了綿羊肉用性能特異主效基因等位基因檢測試劑盒，將檢測過程中所使用的多種試劑存放在一起，方便使用。

本實(shí)用新型提供一種綿羊肉用性能特異主效基因等位基因檢測試劑盒，包括盒體、盒蓋和襯墊，在襯墊12上設(shè)有9個(gè)容器孔，其特征在于：所述容器孔分3列放置，每列之間設(shè)有擋板或凹槽；左列上部設(shè)有容器孔9，容器孔9為長方體形，左列下部橫向并排設(shè)有兩個(gè)容器孔，分別為容器孔1和容器孔2；中間列設(shè)有豎向的兩個(gè)容器孔，分別為容器孔3和容器孔4，所述容器孔4的直徑大于所述容器孔3的直徑；右列設(shè)有豎向的四個(gè)容器孔，分別為容器孔5、容器孔6、容器孔7和容器孔8。

本實(shí)用新型提供一種綿羊肉用性能特異主效基因等位基因檢測試劑盒，包括盒體(11)、盒蓋(10)和襯墊(12)，在襯墊(12)上設(shè)有9個(gè)容器孔，在容器孔中分別放置特異性上下游引物混合溶液和FABP4基因的等位基因的標(biāo)準(zhǔn)樣(4)以及PCR反應(yīng)液(3)；所述FABP4基因的等位基因的標(biāo)準(zhǔn)樣由等量的FABP4*A的標(biāo)準(zhǔn)樣、FABP4*B的標(biāo)準(zhǔn)樣、FABP4*C的標(biāo)準(zhǔn)樣、FABP4*D的標(biāo)準(zhǔn)樣和FABP4*E的標(biāo)準(zhǔn)樣組成。

優(yōu)選地，在所述容器孔中還分別放置20mMNaOH試劑(1)、1倍TE溶液(2)、銀染液(5)、40％的丙烯酰胺溶液(6)、變性上樣緩沖液(7)、TEMED溶液和10％的過硫酸銨溶液(8)和特殊DNA承載濾紙(9)。

進(jìn)一步地，在所述容器孔中分別放置5ml20mMNaOH試劑(1)、5ml1倍TE溶液(2)、2mlPCR反應(yīng)液(3)、0.5ml特異性上下游引物混合溶液和0.5ml等位基因標(biāo)準(zhǔn)DNA樣本、5ml銀染液(5)、10ml40％的丙烯酰胺溶液(6)、0.5ml變性上樣緩沖液(7)、2mlTEMED溶液和2ml10％的過硫酸銨溶液(8)和特殊DNA承載濾紙(9)。

應(yīng)用本實(shí)用新型的試劑盒檢測綿羊肉用性能特異主效基因等位基因的方法如下：

(一)收集具有產(chǎn)肉性能指標(biāo)(腿部肉重、腰部肉重、肩部肉重、總?cè)庵鼗蛲炔咳獗壤⒀咳獗壤图绮咳獗壤?的綿羊DNA血樣。

(二)PCR擴(kuò)增所收集的DNA血樣。

PCR擴(kuò)增時(shí)所使用引物為：

上游引物18bp核苷酸，下游引物20bp核苷酸，擴(kuò)增片段大小約為350bp，具體引物序列如下：

上游引物Up:TGTGGGCTTTGCTACCAG；

下游引物Dn：ACTTAGATGAAGGTGCTCTG。

PCR反應(yīng)體系為：