[發明專利]檢測蕓香科植物過敏原基因的引物、探針、標準品及應用

有效

• 申請號: 201511019719.0
• 申請日: 2015-12-30
• 公開（公告）號: CN105441561B
• 公開（公告）日: 2019-02-19
• 發明（設計）人: 馬兆成;鄧秀新;吳金龍
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 武漢東喻專利代理事務所(普通合伙) 42224
• 代理人: 李佑宏

本發明公開了一種檢測蕓香科植物過敏原基因的引物、Taqman探針、質粒標準品以及它們的應用，其中的引物基于蕓香科植物過敏原基因，包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:(3×n?2)所示，所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:(3×n?1)所示，其中所述n為任意一個大于等于1、小于等于3的正整數。本發明通過對Realtime Taqman PCR檢測蕓香科植物過敏原基因絕對表達量使用的引物、Taqman探針、質粒標準品的核苷酸序列等進行改進，能用于評價蕓香科水果食用部分的致敏能力，對蕓香科植物的遺傳育種改良和食品安全有重要意義。

技術領域

本發明屬于植物分子生物學、人體變態反應學和食品安全交叉領域，更具體地，涉及一種用于精確定量蕓香科植物過敏原基因表達的引物、Taqman探針和質粒標準品，以及它們在蕓香科植物中過敏原基因表達定量檢測的應用。

背景技術

據不完全統計，我國對食物過敏的人群約4000～5000萬人左右。食物過敏的癥狀一般是局部的口腔病理癥狀，除此之外，還有一些其他癥狀，例如腸胃癥狀(惡心、嘔吐、腹瀉、腸胃絞痛等)，皮膚癥狀(麻疹、皮炎、濕疹、血管神經性水腫、皮膚瘙癢等)，呼吸系統癥狀(鼻炎、哮喘、喉嚨腫等)和心血管系統癥狀(過敏性休克等)[1]。對于患者而言，最好的醫治方案是設法剔除飲食中的食物過敏原，或者完全避免會引起的食物過敏的種類，但在實際操作中存在很多困難，故而鑒定和選擇一些不含過敏原或低致敏的食物給過敏患者是一種比較好的解決方案。

柑橘是一類深受人們喜愛的水果，被國內外認為是健康食品，含有豐富的營養物質。柑橘除了果肉具有重要的食用價值之外，果皮、葉片、花粉均具有食用價值。柑橘皮具有較高的加工價值，其不僅富含香精油、色素、果膠、橙皮甙、膳食纖維還可以利用其進行微生物發酵，如生產果醋、乳酸飲料、高蛋白飼料和栽培食用菌[2]。橘葉在中藥中具有價高的利用價值，具有疏肝、行氣、化痰、殺蟲等功效[3]。橘花辛溫，順氣寬膈，和胃去脹，止咳化痰，具有一定的藥用價值，用柑橘花窨制的柑橘花茶亦具有保健功效[4]。這些柑橘加工品均具有特殊的功能，為人們提供豐富的營養。盡管食用柑橘對人體有諸多益處，仍有許多人對柑橘類食物過敏。有研究表明中國大連地區過敏性疾病患兒SPT陽性的食入性過敏原中，柑橘過敏原陽性率7.4％[5]。在招募的對枯草熱花粉過敏患者中，有39％的患者對柑橘類食物表現出交叉過敏癥狀，并且所有的患者的IgE介導免疫反應機制都通過皮膚點刺實驗(SPT)確認呈陽性[6]。目前已有研究表明，Cit s 1、Cit s 2和Cit s 3是三種主要的柑橘過敏原[7-11]。Cit s 1是一種24KD的被患者血清IgE識別的類萌芽素糖蛋白(GLPs)[11]。甜橙抑制蛋白Cit s 2是另外一種主要的普遍存在的過敏原，涉及到植株各種生理和病理的過程[12]。Cit s 3是一種脂質轉運蛋白，是泛過敏原家族的成員[9,10,13]。除此之外，Cit l 3和Cit r 3分別在檸檬和寬皮柑桔中作為過敏原被鑒定[14,15]。據此，檢測柑橘中具有可食用價值部分(如果實、花、嫩葉等)中這三個過敏原蛋白的表達水平，是評價其是否致敏的指標。