[發明專利]大腸桿菌O111檢測用的引物和探針組、試劑盒及PCR檢測方法在審

申請號：	201510967445.1	申請日：	2015-12-18
公開（公告）號：	CN105779584A	公開（公告）日：	2016-07-20
發明（設計）人：	游淑珠;蔡教英;姚麗鋒;馮家望;王小玉;唐食明;鄺筱珊;蔣聯振;符家忍;趙宇清	申請（專利權）人：	珠海出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
主分類號：	C12Q1/68	分類號：	C12Q1/68;C12Q1/10;C12N15/11
代理公司：	廣東朗乾律師事務所 44291	代理人：	楊煥軍
地址：	519015 廣***	國省代碼：	廣東;44
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摘要：
搜索關鍵詞：	大腸桿菌 o111 檢測引物探針試劑盒 pcr 方法
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【說明書】：

【技術領域】

本發明涉及食品安全領域的實時熒光PCR檢測技術，尤其涉及大腸桿菌O111檢測用的引物和探針組、試劑盒及PCR檢測方法。

【背景技術】

大腸桿菌(Escherichiacoli)是一種在人和溫血動物腸道內常見的細菌。大多數大腸桿菌菌株無害，然而，有些大腸桿菌可引起食源性疾病；大腸桿菌的抗原成分復雜，可分為菌體抗原(O)、鞭毛抗原(H)和表面抗原(K)，根據菌體抗原的不同，可將大腸桿菌分為二百多個型，其中有些血清型有致病性，可引起腹瀉，統稱為致瀉性大腸桿菌。

根據生物學特性的不同可將致瀉性大腸桿菌分為5大類：腸致病性大腸桿菌、腸產毒素性大腸桿菌、腸侵襲性大腸桿菌、腸粘附性大腸桿菌和腸出血性大腸桿菌(EHEC)，腸出血性大腸桿菌可產生志賀樣毒素因而也被稱產志賀毒素大腸桿菌為(STEC)。

腸出血性大腸桿菌曾在多個國家暴發流行，成為了全球性的公共衛生問題。腸出血性大腸桿菌感染主要導致腹瀉，可引起嚴重的食源性疾病，它主要通過食用被污染的食品傳染給人類，如生的或未煮熟的碎肉制品、生鮮奶和被污染的生蔬菜和芽苗菜。腸出血性大腸桿菌O157：H7是與公共衛生有關的最重要的腸出血性大腸桿菌的血清類型；另外O26、O45、O103、O111、O121和O145等血清型也是較常見的腸出血性大腸桿菌血清型，不常見的的腸出血性大腸桿菌血清型有大約40種。

大腸桿菌O111的傳統檢驗方法與其它病原微生物的檢測一樣需要在微生物增殖、生化鑒定的基礎上進行血清學鑒定，雖然可靠、但卻很耗時、費力，需要4～7天才能完成。因此，在需要及時、快速評價食品中微生物的安全性時，通常不被采用。

隨著現代檢測技術發展，出現了針對病原微生物的快速檢測方法。實時熒光PCR技術自1996年出現以來在眾多現代檢測技術中脫穎而出，成為檢測領域中重要的一種快速檢測手段。實時熒光PCR法的檢測原理決定了它具有其它分子生物學技術無法比擬的優點：(1)、高效率，節約檢驗時間，擴增和檢測的過程通常少于6小時，PCR方案最優化或使用加快熱循環技術可使整個檢測時間能縮短到2小時以內；(2)、靈敏度高，比培養方法靈敏度有了大幅度提高；(3)、特異性強，檢驗成本合理；(4)、操作簡單快速，與普通PCR相比無須后處理和電泳檢測；(5)可進行準確的定量檢測，實時熒光定量PCR技術實現了PCR從定性到定量的飛躍，克服了終點PCR法進入平臺期或叫飽和期后定量的較大誤差，實現了精確定量；(6)、自動化程度高、無污染，技術易于學習、易于進行電腦化數據管理。

【發明內容】

本發明的第一發明目的是，提供一種利用實時熒光PCR檢測技術、對大腸桿菌O111具有良好特異性的引物和探針組。

本發明的第二發明目的是，提供一種利用實時熒光PCR檢測技術、對大腸桿菌O111進行實時檢測的試劑盒。

本發明的第三發明目的是，提供一種利用實時熒光PCR檢測技術，具有特異性強、靈敏度高、檢測快速可靠、操作簡便，對大腸桿菌O111進行實時檢測的檢測方法。

為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案是：

一種大腸桿菌O111檢測用的引物和探針組，它是由下述引物和探針組成：

上游引物：GAGGGAAATGTGTTAGATG；

下游引物：GTTGGGATTGTTAATTTGTTA；

探針：FAM-TTCTTCAATTAACTGGTGGCGTCTC-BHQ1。

一種大腸桿菌O111檢測用的引物和探針組的檢測試劑盒，它的組成如下：

上游引物，濃度為10μmol/L；

下游引物，濃度為10μmol/L；