[發(fā)明專利]一種金線蓮種質(zhì)資源的低溫保存方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510921672.0
• 申請(qǐng)日: 2015-12-14
• 公開（公告）號(hào): CN105557514B
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李操
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 李操
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 廣州市紅荔專利代理有限公司 44214
• 代理人: 李彥孚;何承鑫

本發(fā)明公開一種金線蓮種質(zhì)資源的低溫保存方法，包括采集野生種苗，將外植體初步處理并進(jìn)行高溫鈍化后；在超凈工作臺(tái)進(jìn)行滅菌處理，后轉(zhuǎn)入金線蓮初代培養(yǎng)基中進(jìn)行低溫誘導(dǎo)分化。分化后經(jīng)低溫、暗處理一段時(shí)間，再將芽球轉(zhuǎn)入金線蓮繼代培養(yǎng)基中。在常溫、光照條件下，培養(yǎng)一段后，再將芽球轉(zhuǎn)入低溫、暗處理，最后將小植株轉(zhuǎn)入金線蓮培養(yǎng)基中常溫、光照下培養(yǎng)。本發(fā)明方法具有成本低，操作簡(jiǎn)易，實(shí)用性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，能夠很好地保護(hù)金線蓮這一珍貴的藥用資源，保護(hù)生物的多樣性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物保存技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種金線蓮種質(zhì)資源的低溫保存方法。

背景技術(shù)

金線蓮別名金線蘭、金絲草，為蘭科開唇植物花葉蘭屬多年生珍稀中草藥。它在民間使用范圍較廣，素有“藥王”、“金草”、“神藥”、“烏人參”等美稱。經(jīng)有關(guān)部門測(cè)定發(fā)現(xiàn)，金絲蓮中氨基酸組成、成分、含量及抗衰老活性微量元素的含量均高于國(guó)產(chǎn)和野生西洋參。幾百年來(lái)作為民間常用草藥。功能與主治：清熱涼血，除濕解毒，平衡陰陽(yáng)、扶正固本，陰陽(yáng)互補(bǔ)、生津養(yǎng)顏、調(diào)和氣血、五臟、養(yǎng)壽延年的功用。入腎、心、肺三經(jīng)，能全面提高人體免疫力，增強(qiáng)人體對(duì)疾病的抵抗力。主治肺熱咳嗽，肺結(jié)核咯血，尿血，小兒驚風(fēng)，破傷風(fēng)，腎炎水腫，風(fēng)濕痹痛，跌打損傷，毒蛇咬傷、支氣管炎、膀胱炎、糖尿病、血尿、急慢性肝炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎腫瘤等疑難病癥。

近幾十年來(lái)，由于該藥具有神奇的療效，鮮品價(jià)格不菲，藥農(nóng)、村民在原生地過(guò)篩樣濫采，如今野生金線蓮幾近滅絕；由于金線蓮種子胚高度發(fā)育不全，自然繁殖力極低，且僅分布于我國(guó)廣西等五省區(qū)，宜生環(huán)境狹窄。因此，如何保護(hù)金線蓮種質(zhì)資源成為非常緊迫的課題。目前，人們對(duì)金線蓮的研究?jī)H限于快速繁殖、藥用成分等方面，而對(duì)金線蓮種質(zhì)資源的保存技術(shù)未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了更好地保護(hù)金線蓮這一珍貴的藥用資源，保護(hù)生物的多樣性，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的研究實(shí)踐，發(fā)明了一種能長(zhǎng)期保存金線蓮種質(zhì)資源的方法，該方法具有成本低，操作簡(jiǎn)易，實(shí)用性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明所使用的技術(shù)方案為：

一種金線蓮種質(zhì)資源的低溫保存方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）野生種苗的采集：到原生境采集生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲害的金線蓮植株；

2）原料處理：將采集的野生種苗清洗干凈，晾干水分后，用3-5g/L的滅菌洗衣粉液浸泡20-30分鐘后，將其沖洗干凈后晾干水分，進(jìn)行高溫鈍化；

3）無(wú)菌操作：切取種苗的莖尖或莖段進(jìn)行滅菌處理，轉(zhuǎn)入金線蓮初代培養(yǎng)基，所述的金線蓮初代培養(yǎng)基包括MS、6-BA、ZT、2,4-D、NAA、蔗糖和瓊脂，培養(yǎng)基pH為5.5-6.0；

4）第一階段，即第1-12個(gè)月，將無(wú)菌操作后的種苗進(jìn)行低溫誘導(dǎo)分化；

5）第二階段，即第13-60個(gè)月，將分化后的種苗進(jìn)行低溫、暗處理；

6）第三階段，即第61-72個(gè)月，將種苗轉(zhuǎn)入金線蓮繼代培養(yǎng)基，所述的金線蓮繼代培養(yǎng)基包括MS、6-BA、ZT 、NAA、蔗糖和瓊脂， 培養(yǎng)基的pH為5.5-6.0，將其置于常溫、光照下培養(yǎng)；

7）第四階段，即第73-96個(gè)月，將種苗轉(zhuǎn)入低溫、暗處理；

8）第五階段，即第97-120個(gè)月，再將種苗轉(zhuǎn)入金線蓮培養(yǎng)基中，所述的金線蓮培養(yǎng)基包括MS、6-BA、ZT、NAA、蔗糖和瓊脂，培養(yǎng)基的 pH為5.5-6.0，置于常溫、光照下培養(yǎng)。

以上所述的步驟2）中高溫鈍化的溫度為35-45℃，鈍化時(shí)間為10-12小時(shí)。

以上所述的步驟3）滅菌處理具體步驟為將種苗的莖尖或莖段用70%乙醇浸泡1-5分鐘后，用無(wú)菌水沖洗1次，再用10% H2O2浸泡浸泡5-10分鐘后，用無(wú)菌水沖洗2次，最后用0.4%HgCL2浸泡3-7分鐘后，無(wú)菌水沖洗2次后，將莖尖或莖段剪去葉片轉(zhuǎn)入金線蓮初代培養(yǎng)基中。