[發明專利]光學活性的β-羥基酯類化合物的制備方法及其中間體

有效

• 申請號: 201510868583.4
• 申請日: 2015-12-01
• 公開（公告）號: CN106811491B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發明（設計）人: 祁彥濤;李濤;王博
• 申請（專利權）人: 焦作健康元生物制品有限公司;上海樸頤化學科技有限公司
• 主分類號: C12P13/00
• 分類號: C12P13/00;C12P13/02;C07C231/12;C07C233/51
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;王衛彬

1.一種光學活性的β-羥基酯類化合物(2S,3R)-2-胺甲基-3-氨基丁酸甲酯(5-1)的制備方法，其特征在于，其包括下列步驟：水中，在pH值為8.0-9.5的條件下，在青霉素酰化酶的作用下，將化合物(4-1)進行水解反應，制得化合物(5-1)；

2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，化合物(5-1)的制備方法包括下列步驟：在pH值為8.0-9.5的條件下，將化合物(4-1)和水的混合液，與青霉素酰化酶混合，進行所述的水解反應，制得化合物(5-1)。

3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，

所述的青霉素酰化酶為青霉素G酰化酶；

和/或，所述的青霉素酰化酶與化合物(4-1)的質量比為1:25-1:60；

和/或，所述的水解反應的溫度為20℃-50℃；

和/或，所述的水解反應的時間為6小時-24小時；

和/或，所述的化合物(5-1)的制備方法中，以堿性物質控制反應體系的pH值在8.0-9.5之間；所述的堿性物質為磷酸氫二鉀水溶液；所述的磷酸氫二鉀水溶液的摩爾濃度為0.05mol/L-0.2mol/L。

4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，

所述的青霉素酰化酶為固定化青霉素G酰化酶；

和/或，所述的青霉素酰化酶與化合物(4-1)的質量比為1:30-1:50；

和/或，所述的水解反應的溫度為30℃-45℃；

和/或，所述的水解反應的時間為8-12小時。

5.如權利要求1-4任一項所述的制備方法，其特征在于，所述的(2S,3R)-2-胺甲基-3-氨基丁酸甲酯(5-1)的制備方法還進一步包含下列步驟：溶劑中，pH值為6.0-9.0的條件下，在氫供體和輔酶因子存在的條件下，在羰基還原酶的作用下，將3-氧代-2-(2-苯乙酰胺甲基)丁酸甲酯(2-2)進行如下所示的催化還原反應，制得所述的(2S,3R)-2-(2-苯乙酰胺甲基)-3-羥基丁酸甲酯(4-1)；

6.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，

所述的羰基還原酶為克菲爾乳桿菌(Lactobacillus kefir)來源的羰基還原酶的突變體；所述的克菲爾乳桿菌來源的羰基還原酶的突變體的氨基酸序列如申請公布號為CN101883846A的中國專利申請中公開的克菲爾乳桿菌來源羰基還原酶突變體中序列表SEQNOID：6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60或62所示；所述的羰基還原酶存在于重組表達該羰基還原酶的基因工程大腸桿菌誘導表達后的菌體細胞破碎液中；所述的重組表達該羰基還原酶的基因工程大腸桿菌誘導表達后的菌體細胞破碎液的制備方法包括下列步驟：將所述的重組表達該羰基還原酶的基因工程大腸桿菌誘導表達后的發酵液，進行離心得到菌體后與水混合，采用超聲波進行細胞破碎，即可；所述的重組表達該羰基還原酶的基因工程大腸桿菌誘導表達后的菌體細胞破碎液與化合物(2-2)的體積質量比為1mL/g-100mL/g；

和/或，化合物(4-1)的制備方法中，所述的溶劑為水和異丙醇的混合溶劑；所述的水和異丙醇的混合溶劑中，水和異丙醇的體積比為3:1-4:1；

和/或，所述的氫供體為異丙醇；

和/或，所述的輔酶因子為NaNADP；

和/或，所述的輔酶因子與溶劑的質量體積比為0.001g/L-0.1g/L；

和/或，所述的催化還原反應的溫度為20℃-45℃；

和/或，化合物(4-1)的制備方法中，以堿性物質控制反應體系的pH值在6.0-9.0之間；所述的堿性物質為氫氧化鈉水溶液或氨水。