[發(fā)明專利]一種漢坦病毒擴(kuò)增方法

在審

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• 申請日: 2015-11-25
• 公開（公告）號: CN105368792A
• 公開（公告）日: 2016-03-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 邵華
• 申請（專利權(quán)）人: 邵華
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種漢坦病毒擴(kuò)增方法，其特征在于該方法以COS-1細(xì)胞作為宿主細(xì)胞擴(kuò)增漢坦病毒，同時以激流式生物反應(yīng)器作為細(xì)胞培養(yǎng)裝置。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于該方法是先以激流式生物反應(yīng)器培養(yǎng)COS-1細(xì)胞，而后再向細(xì)胞培養(yǎng)液中接種漢坦病毒，擴(kuò)增漢坦病毒。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述培養(yǎng)COS-1細(xì)胞，是在激流式生物反應(yīng)器中采用微載體懸浮培養(yǎng)的方式培養(yǎng)COS-1細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于包括以下步驟：

1)向激流式生物反應(yīng)器中加入細(xì)胞培養(yǎng)液，以(0.1～1)×10⁶個細(xì)胞/mL培養(yǎng)液的比例接種COS-1細(xì)胞培養(yǎng)，所述反應(yīng)器中具有微載體；

2)當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到(1～10)×10⁶個細(xì)胞/mL培養(yǎng)液時以0.01～0.03MOI的接種量向培養(yǎng)液中接入漢坦病毒，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞；

3)取培養(yǎng)液固液分離，收集上清即得到漢坦病毒液。

5.根據(jù)權(quán)利要4所述的方法，其特征在于步驟1)中細(xì)胞培養(yǎng)液的加入量為激流式生物反應(yīng)器最大裝液量的1/2～3/4。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于步驟1)中用于接種的COS-1細(xì)胞，是經(jīng)EDTA-胰酶細(xì)胞分散液消化得到COS-1細(xì)胞懸液。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于步驟2)中當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到(1～10)×10⁶個細(xì)胞/mL培養(yǎng)液時，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞4～6h，而后以0.01～0.03MOI的接種量向培養(yǎng)液中接入漢坦病毒，再繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于步驟3)中當(dāng)微載體上細(xì)胞全部脫落后，取培養(yǎng)液固液分離，收集上清即得到漢坦病毒液。

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述細(xì)胞培養(yǎng)液包括以下成分：85～90％(w/w)的DMEM液，青霉素鈉80～120單位/ml，鏈霉素80～120單位/ml，余量為牛血清；所述培養(yǎng)基pH為7～7.8。

10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于步驟1)中對細(xì)胞的培養(yǎng)或步驟2)中接種漢坦病毒后對細(xì)胞的培養(yǎng)，滿足以下培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度35～39℃，培養(yǎng)液pH7～7.8，培養(yǎng)液溶氧45～55％，攪拌速度50～70rpm。