[發明專利]一種針對丙型肝炎病毒包膜蛋白E2的單克隆抗體及應用

有效

• 申請號: 201510856784.2
• 申請日: 2015-11-27
• 公開（公告）號: CN105254756B
• 公開（公告）日: 2018-09-07
• 發明（設計）人: 章曉聯;閩遠琴
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/569;A61K39/395;A61P31/14;C07K16/42;C12R1/91
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 張火春

本發明公開了一種丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）包膜蛋白E2的單克隆抗體（簡稱單抗）制備及其應用。所述的單抗命名為1C1，由本發明制備的雜交瘤細胞株1C1（保藏編號：CCTCC NO：C2015199）分泌并篩選得到。該單抗的表位為構象型表位，能夠結合來自1a、1b、2a、3、4、5、6型別HCV的包膜蛋白E2。本發明得到的單抗1C1具有很好中和HCV，降低其感染細胞的能力，可作為丙型肝炎病毒感染后的治療性抗體，在HCV感染的診斷與預防中具有巨大應用前景。

技術領域

本發明涉及免疫化學、基因工程和細胞生物學領域。具體而言，本發明的目的在于制備一種與丙型肝炎(hepatitis C virus，HCV)包膜蛋白E2相結合的單克隆抗體的雜交瘤；由該雜交瘤產生的抗HCV包膜蛋白E2單克隆抗體及其相應產品可應用于人感染HCV的診斷試劑或用于治療或預防HCV感染的藥物制備。

背景技術

HCV感染人體后，約80％HCV感染者常發展成為慢性肝炎，其中約有10％-20％患者發展肝硬化、肝癌(Ascione A,Tartaglione T,Di Costanzo GG.Naturalhistory ofchronic hepatitis C virus infection.Dig Liver Dis.2007,39Suppl 1:S4-7；Jacobson IM,Davis GL,El-Serag H,Negro F,Trepo C.Prevalence and challengesofliver diseases in patients with chronic hepatitis C virus infection.ClinGastroenterol Hepatol.2010,8:924-933；quiz e117)，嚴重影響人類健康，目前尚無有效的疫苗。目前，在HCV的治療方法上取得了重大的進步，對一些型別的HCV能達到95％以上的治愈率，但仍然有一些抗藥性毒株，且HCV具有高度變異性和異質性，在治療過程中可能很快產生抗性突變毒株(Rice CM,Saeed M.Hepatitis C:Treatmenttriumphs.Nature.2014,510:43-44)。因此，從多種途徑上研制針對HCV的中和性抗體以及疫苗仍然非常迫切。

HCV是有包膜的單股正鏈RNA病毒，其基因組RNA全長約9.6kb，由5’UTR(～341bp)、3’UTR以及中間的一個長的開放閱讀框組成(Choo QL,Richman KH,Han JH,Berger K,LeeC,Dong C,Gallegos C,Coit D,Medina-Selby R,Barr PJ,et al.Genetic organizationand diversity of the hepatitis C virus.Proc Natl Acad Sci U S A.1991,88:2451-2455)。HCV感染細胞后，其基因組能編碼產生約3000個氨基酸的多聚蛋白，該多聚蛋白在共轉運和翻譯后轉運過程中，經過病毒和宿主細胞內蛋白酶的剪切，最終形成10種蛋白：3種結構蛋白(核衣殼蛋白Core、包膜蛋白E1和E2)和7種非結構蛋白P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B(Grakoui A,Wychowski C,Lin C,Feinstone SM,Rice CM.Expression andidentification of hepatitis C virus polyprotein cleavage products.JVirol.1993,67:1385-1395)。非結構蛋白不會被包裝至病毒粒子中。整個病毒粒子是由RNA和core蛋白形成核衣殼，包膜糖蛋白E1和E2組成病毒外殼的主要成分。

在病毒感染的早期階段，由E2與肝細胞表面CD81受體以及清道夫受體BI(SRB1)直接相互作用，介導病毒入侵肝細胞，同時，E2也是中和抗體結合的主要靶點。因而，開發針對E2的中和性抗體將能夠在第一步抑制病毒入侵細胞。