[發明專利]一種便捷式C反應蛋白檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201510853865.7
• 申請日: 2015-11-28
• 公開（公告）號: CN105334318A
• 公開（公告）日: 2016-02-17
• 發明（設計）人: 鄒炳德;鄒繼華;方亮;劉獻文
• 申請（專利權）人: 寧波美康生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/544
• 代理公司: 寧波市鄞州甬致專利代理事務所(普通合伙) 33228
• 代理人: 沈春紅

1.一種便捷式C反應蛋白檢測試劑盒，其特征在于：包括試紙條、用于固定試紙條的上卡槽和下卡槽、射頻識別芯片；所述試紙條包括塑料膠板、和塑料膠板上依次設置的樣品墊、熒光示蹤物標記的C反應蛋白第一抗體承載墊、纖維素膜和吸水墊；所述的第一抗體承載墊和吸水墊分別搭接于纖維素膜的兩端；所述樣品墊的一端搭接于第一抗體承載墊上；所述的樣品墊為經過抗人紅細胞抗體溶液處理、具有吸附紅細胞作用的樣品墊；所述纖維素膜上具有固定C反應蛋白第二抗體的檢測帶T和固定羊抗鼠抗體的質控帶C；所述的試紙條置于上卡槽和下卡槽相互拼合構成的腔體內；所述的上卡槽上對應于樣品墊的位置設置有用于添加用樣品稀釋液稀釋后的目標分析物校準品或待測樣本的加樣孔，對應于纖維素膜位置設置有檢測窗口；所述樣品稀釋液為含有類風濕因子和嗜異性抗體阻斷劑的緩沖液；所述的下卡槽靠近左端設置有射頻識別芯片。

2.根據權利要求1所述的便捷式C反應蛋白檢測試劑盒，其特征在于：所述射頻識別芯片用于存儲試紙條分析物濃度與熒光信號之間的對應關系計算方程、測試板生產日期、批號、有效期、參考范圍信息。

3.根據權利要求1所述的便捷式C反應蛋白檢測試劑盒，其特征在于：所述的C反應蛋白第一抗體為能特異性結合C反應蛋白第一表位的鼠單克隆抗體。

4.根據權利要求1所述的便捷式C反應蛋白檢測試劑盒，其特征在于：所述的C反應蛋白第二抗體為能特異性結合C反應蛋白第二表位的鼠單克隆抗體。

5.根據權利要求1所述的便捷式C反應蛋白檢測試劑盒，其特征在于：所述熒光示蹤物為能在一定波長激發光源的激發下產生熒光的帶有功能團的有機納米微球。

6.根據權利要求1所述的便捷式C反應蛋白檢測試劑盒，其特征在于：所述樣本墊為濾紙、玻璃纖維、聚酯纖維、無紡布中的一種；所述纖維素膜為硝酸纖維素膜；所述熒光示蹤物標記的C反應蛋白第一抗體承載墊為濾紙、玻璃纖維、聚酯纖維、無紡布中的一種；所述吸水墊為濾紙。

7.根據權利要求1所述的便捷式C反應蛋白檢測試劑盒，其特征在于：所述的阻斷劑為鼠熱處理IgG或商業化阻斷劑復合物。

8.一種便捷式C反應蛋白檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：制備步驟包括：

1)熒光示蹤物標記的C反應蛋白第一抗體的制備

用10mmol/L、pH＝6.5的磷酸鹽緩沖液將羧基熒光微球稀釋到濃度為5mg/ml，配制成微球懸液，每10ml上述微球懸液中加入EDAC1～10mg，溶解混勻，室溫靜置1小時，10000rpm離心20min，去上清液，然后將沉淀懸浮于等體積的10mmol/LpH＝7.2的磷酸鹽緩沖液中，超聲分散；然后向羧基微球懸液中加入C反應蛋白第一表位單克隆抗體，每10ml上述微球懸液中加入抗體1～5mg，混合，室溫反應2小時，再向上述微球懸液中加入牛血清白蛋白，使得微球懸液中牛血清白蛋白的濃度為2～20mg/ml，混勻，室溫反應1小時；10000rpm離心20min，去上清，沉淀懸浮于等體積的10mmol/LpH＝7.2的磷酸鹽緩沖液中，超聲分散，4℃保存備用；

2)第一抗體承載墊的制備

用步驟(1)制備的熒光示蹤物標記的C反應蛋白第一抗體噴涂稀釋熒光抗體到0.5～2mg/ml，在三維噴點平臺上將熒光抗體涂于玻璃纖維墊上，37℃干燥1小時，備用；

3)纖維素膜包被抗體

將纖維素膜黏貼在塑料膠板中間位置，用抗體包被稀釋液分別稀釋C反應蛋白第二表位單克隆抗體和羊抗鼠抗體到濃度為0.5～2.0mg/ml制備成噴膜液，其中，在三維噴點平臺上噴膜液以條帶狀噴點在硝酸纖維素膜上適當位置形成固定C反應蛋白第二表位單克隆抗體的檢測帶T和固定羊抗鼠抗體的檢測帶C，37℃干燥1小時，備用；

4)樣品墊的預處理

將裁剪好的樣品墊置于抗人紅細胞抗體溶液中浸泡5分鐘，撈出后瀝干，置于37℃干燥過夜，備用；

5)熒光定量檢測板的組裝

將干燥后的第一抗體承載墊、樣品墊、吸水墊在斬切機上分切成長條狀，按樣品墊、第一抗體承載墊、纖維素膜、吸水墊順序粘帖到塑料膠板上，首尾相互連接，制作成半成品大板，然后用切條機將半成品大板切成4mm寬的試紙條，裝上、下卡槽和射頻識別芯片；

6)校準曲線的建立和射頻識別芯片的寫入

取系列濃度的目標分析物校準品各100ul，滴加到檢測板樣品加入孔中，計時檢測，計時時間結束后立即在熒光檢測儀上檢測，讀取熒光信號T(檢測線)和C(質控線)的熒光信號強度；以校準品濃度為縱坐標，以T熒光信號和C熒光信號比值為橫坐標，進行非線性回歸，得到校準曲線方程；通過射頻識別芯片讀寫軟件將校準曲線方程、批號、項目名稱、有效期、參考范圍、質控線熒光信號有效值、加密密碼等信息寫入熒光定量檢測板中的射頻識別芯片內。