[發(fā)明專利]一種基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)的阿爾法1B受體篩選模型

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510828138.5
• 申請(qǐng)日: 2015-11-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105255991A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-01-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 嚴(yán)明;何玲;張陸勇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)藥科大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/02
• 分類號(hào): C12Q1/02
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥理學(xué)領(lǐng)域，利用細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染技術(shù)，構(gòu)建了腎上腺素α_1B受體拮抗劑藥物的篩選模型，用于待測(cè)樣品對(duì)α_1B的拮抗作用的高通量檢測(cè)。

背景技術(shù)

α₁腎上腺素受體(A₁-adrenoceptor，α₁-AR)屬于G蛋白偶聯(lián)膜表面受體，廣泛分布于血管平滑肌、脂肪、肝、肺、子宮、心肌等機(jī)體的各種器官、組織和細(xì)胞，并介導(dǎo)多種生理效應(yīng)，在調(diào)節(jié)代謝和心血管、神經(jīng)、消化、生殖、內(nèi)分泌等系統(tǒng)的生理活動(dòng)和病理改變等方面有重要的作用，因而受到廣泛重視。根據(jù)國(guó)際藥理聯(lián)合會(huì)受體命名與藥物分類委員會(huì)規(guī)定，將α₁受體分為α_1A、α_1B、α_1D3種亞型。

BPH為一種常見(jiàn)的老年病，發(fā)病率極高，常導(dǎo)致患者排尿困難、殘尿、尿急、尿頻、血尿、夜尿等，其主要治療方法有手術(shù)法和藥物療法。近年來(lái)，有研究表明切除前列腺的患者常會(huì)發(fā)生性功能障礙等副作用，尋求安全有效的藥物治療方法對(duì)治療前列腺增生具有重要意義。α₁腎上腺素受體拮抗劑能夠減輕括約肌緊張程度和前列腺增生程度從而緩解癥狀，是目前公認(rèn)的治療BPH及由其引起的下尿路癥狀(LUTS)的首選藥物。

在中國(guó)人的前列腺組織中，α_1A-AR的百分含量為30％，α_1B-AR為45％，α_1D-AR為25％。目前臨床上應(yīng)用的α₁受體拮抗劑，如哌唑嗪、多沙唑嗪等藥物對(duì)α₁受體亞型缺乏選擇性，由于α₁受體的廣泛分布和重要生理功能，使用α₁受體拮抗劑常會(huì)出現(xiàn)體位性低血壓、頭暈、無(wú)力等副作用。其不良反應(yīng)主要是由于拮抗α_1B受體后產(chǎn)生，故通過(guò)檢測(cè)藥物對(duì)α_1B的拮抗作用來(lái)考察在治療過(guò)程中是否產(chǎn)生不良反應(yīng)。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立腎上腺素α_1B受體拮抗劑藥物篩選模型，為有效控藥物在治療前列腺增生中產(chǎn)生的不良反應(yīng)具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于建立一種腎上腺素α_1B受體拮抗劑高通量篩選模型，具有信噪比高，使用安全，樣品消耗量小的特點(diǎn)。

本發(fā)明的技術(shù)方案：

本發(fā)明利用穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的方法建立了一種腎上腺素α_1B受體拮抗劑高通量篩選模型。

步驟一：α_1B受體拮抗劑篩選模型的建立與優(yōu)化。

步驟二：陽(yáng)性藥驗(yàn)證模型可靠性。

步驟三：高通量篩選模型驗(yàn)證。

附圖說(shuō)明：

圖1：IP1標(biāo)準(zhǔn)稀釋液在Paradigm中的讀值。(n＝3，)

圖2：Phenylephrine作用不同細(xì)胞數(shù)所產(chǎn)生量效曲線EC₅₀的比較。(n＝3，)

圖3：HEAThydrochloride拮抗CHO/α_1B穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞產(chǎn)生的量效曲線。(n＝3，)

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖說(shuō)明本發(fā)明的具體實(shí)施方式：

一、α_1B受體拮抗劑篩選模型的建立

1、實(shí)驗(yàn)材料

CHO/α_1B細(xì)胞株、F12、10％FBS、400μg/mLG418、StimulationBuffer(SB)、CO₂培養(yǎng)箱、384孔板、Paradigm^TMDetectionPlatform。

2、實(shí)驗(yàn)步驟

(1)細(xì)胞培養(yǎng)

1)T25中培養(yǎng)的細(xì)胞貼壁度要達(dá)到80％，達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。

2)將貼壁細(xì)胞經(jīng)EDTA消化、離心后重懸，對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)。

3)用培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞懸液，使細(xì)胞密度達(dá)到7.5×10⁵cells/mL，將此細(xì)胞懸液移入T25培養(yǎng)瓶中，在37℃/5％CO₂環(huán)境下培養(yǎng)細(xì)胞。