[發(fā)明專利]一種含黑色素的體外皮膚測(cè)試模型及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510795792.0
• 申請(qǐng)日: 2015-11-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105353114A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-02-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 程蕊蘋;盧永波;李瀟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陜西博溪生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/50
• 分類號(hào): G01N33/50
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于組織工程學(xué)生物材料領(lǐng)域，具體涉及一種含黑色素的體外皮膚測(cè)試模型及其制備方法。

背景技術(shù)

化妝品、藥品、化學(xué)品等產(chǎn)品上市前都要進(jìn)行大量的測(cè)試以保障產(chǎn)品的安全性與功效性。傳統(tǒng)的檢測(cè)一般通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行，但由于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的偏差性及3R理論的提出，促使研究者努力尋找更合適的檢測(cè)的方法。目前已基于組織工程原理構(gòu)建出多種皮膚模型，用于替代動(dòng)物模型來(lái)研究皮膚的不同生物學(xué)功能，以及皮膚對(duì)化妝品或藥物制劑的反應(yīng)。良好的皮膚模型應(yīng)具有與人類皮膚檢測(cè)結(jié)果的高度一致性。

在化妝品的安全性及功能效果檢測(cè)中，皮膚模型的應(yīng)用已經(jīng)被人們所接受。比如，EpiDerm(MatTekCorporation)和EPISKIN(EPISKINSNC)已經(jīng)完成正式的體外皮膚刺激性檢測(cè)驗(yàn)證，并納入OECDTG439指南。

含祛斑美白成分的化妝品、藥物目前深受廣大消費(fèi)者的歡迎。而這些產(chǎn)品在使用于人體前，需要對(duì)其祛斑、美白功效加以驗(yàn)證。目前美白原料及化妝品功效驗(yàn)證方法較多采用的是動(dòng)物模型如豚鼠進(jìn)行驗(yàn)證，但動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與人體結(jié)果會(huì)出現(xiàn)一定的偏差，而且在歐盟對(duì)化妝品的管理?xiàng)l例中，將逐漸取消動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。利用人工皮膚模型檢測(cè)是目前化妝品、藥物檢測(cè)是目前檢測(cè)的一大方向，但是目前還未有被認(rèn)可的皮膚模型用于祛斑美白功效的檢測(cè)。

專利200910138703.X公開(kāi)了一種采用膠原、層粘連蛋白、成纖維細(xì)胞制備的支架結(jié)構(gòu)即真皮層，然后接種角質(zhì)形成細(xì)胞、黑色素細(xì)胞，并通過(guò)體外培養(yǎng)制備出功能性色素等同物。這種方法所制備的皮膚模型可包含真皮層和表皮層。但是這種皮膚模型含有的真皮層中的細(xì)胞外基質(zhì)主要來(lái)源于動(dòng)物，后期培養(yǎng)中這些膠原會(huì)有較快的降解，易發(fā)生結(jié)構(gòu)收縮，從而導(dǎo)致整體模型的損壞，難以應(yīng)用于長(zhǎng)期穩(wěn)定的檢測(cè)中。

專利201019018002.2中采用生物可降解材料支撐膜模擬真皮層，表皮層利用角質(zhì)形成細(xì)胞、黑色素細(xì)胞共同接種，構(gòu)建的含黑色素細(xì)胞的皮膚模型。此種含黑色素細(xì)胞的皮膚只含有表皮層。

專利201410045511.5中構(gòu)建的含黑色素皮膚模型，其真皮層以凝固的膠原為主要材料，在其上單次接種了成纖維細(xì)胞、黑色素細(xì)胞及表皮細(xì)胞，構(gòu)建含黑色素的皮膚模型，但其在接表皮細(xì)胞前未有真皮層細(xì)胞外基質(zhì)的沉積，并未對(duì)黑色素模型的后期穩(wěn)定性做一定的研究。

從以上的分析中可以看出，雖然現(xiàn)在已有相關(guān)的黑色素模型被開(kāi)發(fā)，但是這些模型的基底層主要來(lái)源于外源的細(xì)胞外基質(zhì)或惰性載體，這樣的基底層不能很好地模擬天然皮膚的基底層結(jié)構(gòu)，因此在后期升發(fā)過(guò)程中存在一定的局限性，最終導(dǎo)致了黑色素模型后期培養(yǎng)的穩(wěn)定性較差。結(jié)合目前人們對(duì)藥物及化妝品的長(zhǎng)期功效具有較高的要求。因此，建立具有高穩(wěn)定性的黑色素皮膚模型具有較好的市場(chǎng)與前景。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的是提供一種含黑色素的體外皮膚測(cè)試模型和制備方法及其應(yīng)用，所制備的含黑色素的皮膚測(cè)試的模型機(jī)械性能良好，后期培養(yǎng)穩(wěn)定性好，真表皮連接緊密，表皮層結(jié)構(gòu)分化結(jié)構(gòu)良好，可用于各種藥物及化妝品的祛斑美白功效的體外長(zhǎng)期檢測(cè)。

本發(fā)明所提供的黑色素的體外皮膚測(cè)試模型的特征在于：其包括含有活性成纖維細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)的真皮層及含有黑色素細(xì)胞和表皮細(xì)胞的表皮層；所述的含有活性成纖維細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)的真皮層是由6～10層成纖維細(xì)胞及成纖維細(xì)胞自身分泌的細(xì)胞外基質(zhì)；所述表皮層包含：由黑色素細(xì)胞和角質(zhì)細(xì)胞所形成的基底層、棘細(xì)胞層、顆粒層和角質(zhì)層；所述黑色素的體外皮膚測(cè)試模型的真皮層中成纖維細(xì)胞有數(shù)層排列，表皮層中含有基底層、棘細(xì)胞層、顆粒層和角質(zhì)層，與天然皮膚結(jié)構(gòu)有高度一致性，且在UV（紫外光）照射下，有黑色素產(chǎn)生，具有與正常皮膚高度一致的生物學(xué)反應(yīng)。

本發(fā)明含黑色素的體外皮膚測(cè)試模型的制備方法，包括以下步驟：

步驟一、真皮層的構(gòu)建：