[發明專利]一種銀杏酮酯中黃酮類和有機酸類成分指紋圖譜的檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 201510729310.1
• 申請日: 2015-10-30
• 公開（公告）號: CN105259268A
• 公開（公告）日: 2016-01-20
• 發明（設計）人: 吳佩穎;閆玉嬌;高崎;顧慧芬
• 申請（專利權）人: 上海杏靈科技藥業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 許驊;許亦琳

技術領域

本發明屬于中藥成分分析檢測技術領域，涉及一種銀杏酮酯中黃酮類和有機酸類成分指紋圖譜的檢測方法及其應用，具體涉及一種銀杏酮酯中黃酮類和有機酸類藥味成分指紋圖譜的檢測方法及其在含量測定中應用。

背景技術

銀杏葉為銀杏科植物銀杏的干燥葉，性甘，苦，澀，平，歸心、肺經，《中藥志》中記載銀杏葉能“斂肺氣，平咳喘，止帶濁”。銀杏酮酯(GinkgoBilobaExtract，GEB50)是我國自主研發的新一代銀杏葉提取物產品，已獲得原國家二類新藥，并通過了美國臨床預審進入IND階段，主要用于治療心腦血管疾病及神經系統疾病。其中，現已獲得我國國家食品藥品監督管理局批準文號的銀杏酮酯的制劑共8種(銀杏酮酯原料藥，銀杏酮酯片，銀杏酮酯顆粒，銀杏酮酯膠囊，銀杏酮酯分散片，銀杏酮酯滴丸3種)。

我國雖是銀杏葉資源大國，但出口產品僅用于食品添加劑或保健品，故質量標準不高。中藥質量標準的提高成為中藥發展的瓶頸，現代化的質量標準是提高國際競爭力的前提。根據2015版《中國藥典》，目前，銀杏酮酯的質量標準檢測項包括：制法、性狀、鑒別、檢查(水分、熾灼殘渣、重金屬、黃酮苷元峰面積比、總銀杏酸)、含量測定(總黃酮醇苷、萜類內酯)、貯藏、制劑。但銀杏酮酯中仍有大部分尚不清楚的成分，只測定目標成分含量并不能真正反映其質量穩定，故指紋圖譜分析、原型黃酮苷類成分的測定日益引起關注。

中藥指紋圖譜具有整體、宏觀、模糊分析等特點，可通過對中藥整體特征的描述，采用適當模糊處理方式，達到整體質量控制的目的，因此成為中藥質量控制的有效手段。其中色譜指紋圖譜分析可以使中藥所含多種化學組分的整體特征可視化，從而披露出常規檢驗難以發現的質量問題。雖然銀杏葉提取物的指紋圖譜還未被編入《中國藥典》，但銀杏葉提取物中黃酮苷元本身的含量較低，如人為添加如槲皮素等黃酮苷元，則測得的總黃酮醇苷含量結果明顯增高，表面上符合要求，實際影響藥品內在質量。為保證生產原料質量穩定；為防止生產過程中摻假、摻雜現象；為保證不同批次原料藥一致性，本課題擬將銀杏酮酯指紋圖譜與多成分含量測定相結合，提高現有質量標準。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種銀杏酮酯中黃酮類和有機酸類成分指紋圖譜的檢測方法及其應用，采用優化條件的高效液相色譜方法首次建立了銀杏酮酯中黃酮類和有機酸類成分的指紋圖譜，并且同時一次對銀杏酮酯中多種成分進行定量分析。本發明中方法通過指紋圖譜和多成分含量測定可以比較全面的反映銀杏酮酯中黃酮類和有機酸類成分的現狀，提高銀杏酮酯中黃酮類和有機酸類成分的質控水平。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明第一方面提供一種銀杏酮酯中黃酮類和有機酸類成分指紋圖譜的檢測方法，包括以下步驟：

1)供試品溶液的制備：稱取銀杏酮酯，加入甲醇水溶液，渦旋提取后，過濾，取續濾液，即得供試品溶液；

優選地，所述銀杏酮酯加入的重量與所述甲醇水溶液加入的體積之比為1：80-120(g/ml)。

更優選地，所述銀杏酮酯加入的重量與所述甲醇水溶液加入的體積之比為1：100(g/ml)。

所述銀杏酮酯和甲醇水溶液稱取時，應當精密稱取。

優選地，所述渦旋提取的條件為：提取時間：3-10min；渦旋轉速：2500-3000r/min。

更優選地，所述渦旋提取的條件為：提取時間：5min；渦旋轉速：2800r/min。

所述渦旋提取是利用渦旋振蕩器對樣品進行的一種提取方式，通過偏心旋轉使試管等容器中的溶劑產生渦流，從而使樣品與溶劑充分混合后提取樣品中所需成分，該提取方法對于一些難溶解物質也有較好溶解及提取效果。

所述供試品溶液在密閉容器中進行渦旋提取，所述密閉容器為密閉的離心管或試管。

優選地，所述過濾的方式為濾膜過濾方式。更優選地，所述濾膜的孔徑為0.45μm。

2)參照品溶液的制備：稱取蘆丁對照品，加入甲醇水溶液溶解并定容，即得參照品溶液；

優選地，所述參照品溶液中蘆丁的CAS號為153-18-4。

優選地，所述參照品溶液中蘆丁的濃度為200-300μg/ml。更優選地，所述參照品溶液中蘆丁的濃度為250μg/ml。

優選地，步驟1)或步驟2)中，所述甲醇水溶液為10-90v/v％甲醇水溶液。

更優選地，所述甲醇水溶液為10-70v/v％甲醇水溶液。

最優選地，所述甲醇水溶液為60v/v％甲醇水溶液。