[發明專利]一種肉食螨變應原

在審

• 申請號: 201510725111.3
• 申請日: 2015-11-02
• 公開（公告）號: CN106632631A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 郝廷;鄭美林;劉騰飛;王玉玲;鮑亞麗;馬博晨;周俊雄
• 申請（專利權）人: 北京新華聯協和藥業有限責任公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/34;C07K1/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種肉食螨變應原，具體指普通肉食螨變應原。

2.根據權利要求1所述普通肉食螨變應原，其特征在于，肉食螨變應原原材料通過種子建立、接種培養、收集純化、脫脂、干燥制各成原材料。

3.根據權利要求1或2所述普通肉食螨變應原，原材料按照1～2∶20(w/v)比例提取液提取，離心、過濾、超濾濃縮、真空冷凍干燥，制備成普通肉食螨變應原。

4.普通肉食螨變應原原材料的制備方法，采用下述步驟制備：

1)種子建立

螨種收集培養：廣泛收集起居室床上、枕頭、被褥、沙發、地毯等中的粉塵以及房舍灰塵。24℃～27℃、相對濕度為60～75％的環境中培養2～4個月。

分離鑒定：粉塵、灰塵中有普通肉食螨活動時，用接種針挑出，進行培養。

種子培養：培養基為：豬肉粉30％、小麥胚芽40％、大豆蛋白粉30％，培養基各成分分別通過100目以上的分樣篩，鈷60照射滅菌處理。分離的普通肉食螨24℃～27℃、相對濕度為60～75％的環境中避光培養2～3個月。普通肉食螨種子于20℃～25℃、相對濕度為50～70％條件下避光保存，每3～6個月傳代一次。

2)接種培養：培養基為：豬肉粉30％、小麥胚芽40％、大豆蛋白粉30％，培養基各成分分別通過100目以上的分樣篩，鈷60照射滅菌處理。種子進行接種，于24℃～27℃、相對濕度為60～75％條件下避光培養2～3個月。

3)收集：將培養瓶內的普通肉食螨與培養基的混合物倒入準備好的不銹鋼盤中，放入-80℃冰箱過夜，真空冷凍干燥48h以上。

4)純化：將普通肉食螨原材料通過100目分篩，超聲篩分純化，取其篩上部分，鏡檢普通肉食螨含量95％以上為合格。

5)脫脂：加入2倍體積的-20℃以下丙酮脫脂，振蕩30min后靜置5min，重復操作，直至上清液無色為止。

6)干燥：棄去廢液后將固體物在濾紙上攤開，真空干燥48h以上。

7)保存：-20℃以下密封避光保存。

5.普通肉食螨變應原制備方法，采用下述步驟制備：

1)提取：普通肉食螨變應原原材料與50mM磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液按1～2∶20(w/v)的比例混合，在溫度2～8℃，攪拌提取24h。

2)離心：于4℃，8000rmp離心15～30分鐘。

3)過濾：過濾上清液濾紙過濾，0.22μm膜過濾。

4)濃縮：用截留分子量5kD的膜，以pH8的50mM磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液衡濾，至濾出液無色為止，超濾濃縮至體積為原體積的三分之一，收集回流液，經0.22μm膜過濾除菌得普通肉食螨變應原原液。

5)真空冷凍干燥：用甘露醇水溶液稀釋到規定濃度，甘露醇終濃度為2％。稀配后的普通肉食螨變應原原液經0.22μm膜過濾除菌后分裝到西林瓶中，每瓶1ml。真空冷凍干燥48h以上，即得普通肉食螨變應原。

6)保存：-20℃以下密封避光保存。