[發(fā)明專利]黃芪多糖在骨髓間充質(zhì)干細胞中的應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510718180.1
• 申請日: 2015-10-29
• 公開（公告）號: CN105349486A
• 公開（公告）日: 2016-02-24
• 發(fā)明（設計）人: 劉永琦;何建新;舍雅麗;張志明;雍文興;張月梅
• 申請（專利權）人: 甘肅中醫(yī)藥大學
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61K31/715;A61P35/00
• 代理公司: 北京中恒高博知識產(chǎn)權代理有限公司 11249
• 代理人: 呂玉博

技術領域

本發(fā)明涉及黃芪多糖在骨髓間充質(zhì)干細胞中的應用。

背景技術

骨髓間充質(zhì)干細胞(bonemesenchymalstemcells,BMSCs)已成為肺癌等腫瘤細胞學治療的最佳干細胞之一，但因其在腫瘤環(huán)境中可向惡性轉化，其安全問題日漸突出。研究肺癌微環(huán)境中BMSCs惡性轉化的機制并篩選可預防其惡變的藥物日益受到重視。表觀遺傳原理與技術已成為探討腫瘤發(fā)生機制及篩選防治腫瘤中藥有效部位的重要途徑之一。

黃芪有補氣升陽、益衛(wèi)固表、利尿消腫、托毒生肌之功效，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，謂其“主癰疽，久敗瘡，排膿，止痛，大風癩疾，五痔，鼠瘺”，列于上品，是常用補益藥之一。從上世紀70年代開始，人們便開始對黃芪在臨床上的應用進行研究。藥用黃芪有兩種：豆科植物蒙古黃芪[Astragalusmongholicus(Bge.)Hsiao]及膜莢黃芪[A.menbranaceus(Fisch.)Bge]的干燥根。其主要有效成分包括黃芪多糖(AstragalusPolysacharin，APS)、黃芪總苷(Astragalosides)、黃酮類、氨基酸等。近年來，國內(nèi)對其抗腫瘤作用的研究較為活躍。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了黃芪多糖在骨髓間充質(zhì)干細胞中的應用，黃芪多糖對骨髓間充質(zhì)干細胞具有良好的保護作用。

本發(fā)明提供黃芪多糖在骨髓間充質(zhì)干細胞中的應用。

作為優(yōu)選，所述應用為黃芪多糖對骨髓間充質(zhì)干細胞的增殖和遺傳穩(wěn)定性的保護作用。本發(fā)明還要求保護黃芪多糖在制備保護骨髓間充質(zhì)干細胞的增殖和遺傳穩(wěn)定性的藥物中的應用。

作為優(yōu)選，所述應用為黃芪多糖在腫瘤環(huán)境中對骨髓間充質(zhì)干細胞的增殖和遺傳穩(wěn)定性的保護作用。本發(fā)明還要求保護黃芪多糖在制備腫瘤環(huán)境中保護骨髓間充質(zhì)干細胞的增殖和遺傳穩(wěn)定性的藥物中的應用。

進一步地，所述黃芪多糖的濃度為1-50μg/ml。

作為優(yōu)選，所述應用為黃芪多糖在甲醛環(huán)境中對骨髓間充質(zhì)干細胞的增殖和遺傳穩(wěn)定性的保護作用。本發(fā)明還要求保護黃芪多糖在甲醛環(huán)境中保護骨髓間充質(zhì)干細胞的增殖和遺傳穩(wěn)定性的藥物中的應用。

進一步地，所述黃芪多糖的濃度為50-100μg/ml。

作為優(yōu)選，所述應用為黃芪多糖在輻射條件下對骨髓間充質(zhì)干細胞的增殖和遺傳穩(wěn)定性的保護作用。本發(fā)明還要求保護黃芪多糖在輻射條件下保護骨髓間充質(zhì)干細胞的增殖和遺傳穩(wěn)定性的藥物中的應用。

進一步地，所述黃芪多糖的濃度為1-50μg/ml。

本申請還提供黃芪多糖在制備預防骨髓間充質(zhì)干細胞惡變的藥物中的應用。

本申請人研究了黃芪提取物黃芪多糖對肺癌微環(huán)境誘導下BMSCs細胞形態(tài)學、生長周期、染色體核型變化、CEA等肺癌相關蛋白的表達水平，以及對p16等肺癌相關基因甲基化、組蛋白乙?；?、關鍵基因轉錄水平等的影響；統(tǒng)計分析BMSCs表觀遺傳變化與關鍵基因轉錄、癌相關蛋白表達水平的相關性及黃芪提取物的調(diào)控作用。揭示BMSCs惡性轉化的能力及其機制，并篩選出可預防其惡性轉化的黃芪有效部位，為黃芪聯(lián)合BMSCs安全有效地臨床應用奠定基礎。本申請人還研究了甲醛對BMSCs的增殖和遺傳毒性影響，并用黃芪進行干預，闡明黃芪對甲醛環(huán)境中BMSCs的保護作用，不但為甲醛導致白血病的發(fā)生提供生物學依據(jù)，而且為甘肅地方中藥材的臨床應用進一步提供實驗依據(jù)。同時，本申請人經(jīng)試驗發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖對X射線輻射誘發(fā)細胞基因組DNA損傷也有防護作用。可見，黃芪多糖對各種因素造成的骨髓間質(zhì)干細胞的損傷均具有防護作用，能夠作為預防其惡變的藥物使用。

附圖說明

附圖用來提供對本發(fā)明的進一步理解，并且構成說明書的一部分，與本發(fā)明的實施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構成對本發(fā)明的限制。在附圖中：

圖1為共培養(yǎng)體系的基本組成示意圖；

圖2為不同濃度APS對BMSCs的增殖率；

圖3為不同濃度APS對A549細胞的抑制率；

圖4為共培養(yǎng)后細胞形態(tài)變化圖；其中，A：BMSCs(100×)；B：APS干預組(100×)；C：CO-BMSCs(100×)；D：CO-BMSCs，(oil，1000×)E：A549(100×)；

圖5為各組細胞周期的變化；

圖6為APS干預共培養(yǎng)后Westernblot結果；

圖7為APS干預共培養(yǎng)后蛋白相對表達值(n＝3)；其中，**表示與CO-BMSCs比較，p<0.01；NS表示與BMSCs比較，p>0.05；