[發(fā)明專利]一種GII.17型諾如病毒基因組擴(kuò)增引物和擴(kuò)增方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510617459.0
• 申請(qǐng)日: 2015-09-23
• 公開（公告）號(hào): CN105176984B
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 薛亮;吳清平;蔡偉程;蔡淑珍;張菊梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東省微生物研究所;廣東環(huán)凱微生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12N15/10
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

1.一種GII.17型諾如病毒基因組擴(kuò)增引物，其特征在于，包括七對(duì)擴(kuò)增引物：

引物對(duì)1：II-P1F：5′-GTGAATGAAGATGGCGTCTAAC-3′；

II.17-1R：5′-GCAACTTTCTTGGCTAGCTC-3′；

引物對(duì)2：II.17-2F：5′-CATACATGAGGACTCTTGAC-3′；

II.17-2R：5′-CTTAGCAATGGCAAGCTC-3′；

引物對(duì)3：II.17-3F：5′-CAGGGATGAAGATGACCTCAC-3′；

II.17-3R：5′-GAGACCACCAAATGCTCTG-3′；

引物對(duì)4：II.17-4F：5′-CCTCGACAAGACAACCTCC-3′；

G2SKR：5′-CCRCCNGCATRHCCRTTRTACAT-3′；

引物對(duì)5：NV2of2：5′-GGAGGGCGATCGCAATC-3′；

GV132：5′-CCRGCRAAGAAAGCTCCAGCCAT-3′；

引物對(duì)6：II.17-6F：5′-GCTCACTCTGGAGACTATC-3′；

II.17-6R：5′-TCACTAAACACGTGACTCC-3′；

引物對(duì)7：II.17-Seq1R：5′-ACTTCTCTCTGGCTAAGTGG-3′；

II.17-Seq6F：5′-CAACCAAGCAGCTGCAATC-3′；

R代表A/G，H代表A/C/T，N代表堿基A/C/T/G。

2.一種GII.17型諾如病毒基因組的擴(kuò)增方法，其特征在于，分別以權(quán)利要求1所述的引物對(duì)II-P1F/II.17-1R、II.17-2F/II.17-2R、II.17-3F/II.17-3R、II.17-4F/G2SKR、NV2of2/GV132、II.17-6F/II.17-6R和II.17-Seq1R/II.17-Seq6F作為擴(kuò)增引物的上下游引物，以GII.17型諾如病毒的RNA為模板進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，分別得到擴(kuò)增產(chǎn)物，然后對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行核酸序列測(cè)定，再拼接比對(duì)，得到GII.17型諾如病毒基因組全長(zhǎng)序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的擴(kuò)增方法，其特征在于，所述的RT-PCR，其反應(yīng)體系為：含有2×one-step RT-PCR mixture 10μL，10μmol/L上游引物和10μmol/L下游引物各0.6μL，MLV/RNasin/HS-Taq酶混合液0.8μL，RNA模板2μL，其余由雙蒸水補(bǔ)足至20μL；反應(yīng)條件為：50℃反轉(zhuǎn)錄30min，94℃預(yù)變性3min，然后94℃30s、55℃30s、72℃80s，共30次循環(huán)后，72℃最后延伸7min。