[發明專利]與小麥葉片葉綠素含量和粒重相關的基因、其Indel標記及應用

有效

• 申請號: 201510613327.0
• 申請日: 2015-09-23
• 公開（公告）號: CN105132440B
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發明（設計）人: 朱曉峰;常成;張海萍;曹佳佳;張衡;張禮廉;曹雪蓮;盧杰;司紅起;馬傳喜
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N15/11;C12Q1/6895
• 代理公司: 北京市京大律師事務所 11321
• 代理人: 劉向輝;王凝

1.與小麥花后旗葉葉片葉綠素含量和千粒重相關基因TaBAS1-2B共分離的Indel標記，其特征在于，用于擴增所述Indel標記的引物對為：

上游引物F：5’-CGCAGTGCCTGTCGTTTC-3’

下游引物R：5’-TCACATACTTCTTCCCAAT-3’

所述引物對擴增的與小麥花后旗葉葉片較高葉綠素含量和較高千粒重相關的Indel標記特征條帶為494bp，其核苷酸序列如Seq ID No.3所示；所述引物對擴增的與小麥花后旗葉葉片較低葉綠素含量和較低千粒重相關的Indel標記特征條帶為493bp，其核苷酸序列如Seq ID No.4所示。

2.權利要求1所述Indel標記在篩選花后旗葉具有較高葉綠素含量和較高千粒重的小麥種質資源中的應用，其特征在于，包括如下步驟：

1）提取待測植株的基因組DNA；

2）以待測植株的基因組DNA為模板，利用權利要求1所述引物F和R，進行PCR擴增反應；

3）檢測PCR擴增產物，如果能夠擴增出如Seq ID No.3所示核苷酸序列的特征條帶，則待測植株為花后旗葉葉片具有較高葉綠素含量和較高千粒重的小麥資源。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，步驟2）中PCR反應使用的擴增體系以10μl計為：模板DNA 100ng，10μM引物F和R各0.2μl，2.5mM dNTP 0.8μl，5U/μl Taq DNA聚合酶0.12μl，含25mM Mg²⁺的10×PCR反應緩沖液1.0μl，ddH₂O補足至10μl。

4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，步驟2）中PCR反應使用的擴增程序為：94℃5分鐘；94℃ 50秒，58℃ 50秒，72℃ 3分鐘，36個循環；72℃ 10分鐘。

5.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，步驟3）中采用6%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測PCR擴增產物，然后銀染顯色。