[發明專利]一種藻體中富里酸亞組分的分級提取方法

有效

• 申請號: 201510586475.8
• 申請日: 2015-09-16
• 公開（公告）號: CN105092339A
• 公開（公告）日: 2015-11-25
• 發明（設計）人: 白英臣;吳豐昌;符志友;宋凡浩;陳曲
• 申請（專利權）人: 中國環境科學研究院
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/40
• 代理公司: 北京精金石專利代理事務所(普通合伙) 11470
• 代理人: 劉曄

技術領域

本發明涉及藻體分離提取技術領域，具體涉及一種藻體中富里酸亞組分的分級提取方法。

背景技術

富里酸是腐殖質的一個重要組分部分，它能溶于酸、堿和中性溶液，是水體、土壤有機質重要組成部分。富里酸的結構非常復雜，元素組成和化學結構隨時空和來源而變化。富里酸在環境地球化學及全球生態系統中具有重要作用，前人對于海洋、河水、廢水等各種來源富里酸的地球化學特征開展了廣泛的研究，已經取得了一系列進展。一般認為：富里酸是由動植殘體經過復雜的物理、化學及生物過程形成的大分子有機混合物，而對活體生物體，包括藻體中富里酸的研究較少。

為了更近一步的研究富里酸的結構和組成，前人將富里酸亞組分進行分級分離，從而減小其異質性，取得一系列成果。目前針對土壤富里酸亞組分的分級分離技術有一定的報道，土壤富里酸分離方法分為兩個過程：（1）富里酸的提取過程：從土壤中提取富里酸；（2）富里酸亞組分分級過程：基于不同組成和結構富里酸亞組分與XAD—8的結合能力不同進行分離。例如Dai等首先將土壤富里酸吸附在XAD—8樹脂上，然后利用三種不同pH有機緩沖液、水及乙醇淋洗樹脂，得到5種富里酸亞組分分級樣品（Dai,J.,Ran,W.,Xing,B.,Gu,M.&Wang,L.CharacterizationoffulvicacidfractionsobtainedbysequentialextractionswithpHbuffers,water,andethanolfrompaddysoils.Geoderma135,284–295(2006).）；Li等利用四種不同比例甲醇和鹽酸溶液淋洗樹脂，得到4種土壤富里酸亞組分分級樣品（Li,A.,Hu,J.,Li,W.,Zhang,W.&Wang,X.Polaritybasedfractionationoffulvicacids.Chemosphere.77,1419–1426(2009).）；Bai等利用5種不同pH的焦磷酸鈉緩沖溶液淋濾樹脂，得到5種土壤富里酸亞組分分級樣品（BaiY.,WuF.,XingB.,MengW.,ShiG.,MaY.&GiesyJ.IsolationandCharacterizationofChineseStandardFulvicAcidSub-fractionsSeparatedfromForestSoilbyStepwiseElutionwithPyrophosphat.ScientificReports.5,8723|DOI:10.1038/srep08723(2015)）。但針對藻體富里酸的分級提取尚無報道。藻體中富里酸亞組分可能和藻體組分分為不同的結合形態和不同的結合強度。前人的富里酸亞組分分級過程與富里酸亞組分存在狀態無關，不能反映富里酸亞組分的賦存狀態和理化性質；也不能實現富里酸亞組分的提取過程和分級過程的統一。

本發明專利利用焦磷酸鈉和氫氧化鈉分別對富里酸亞組分進行多次分級提取，通過多次分離完成對藻體中的富里酸亞組分的充分提取，同時實現了富里酸亞組分分級過程與提取過程。

發明內容

為充分實現對藻體中的富里酸亞組分的分離富集，本發明公開了一種藻體中富里酸亞組分的分級提取方法，通過該方法，分級提取藻體中的富里酸亞組分，并制備了一系列分級提取的富里酸亞組分樣品，以供后續研究使用。

本發明公開了一種藻體中富里酸亞組分的分級提取方法，所述分級提取方法包括如下步驟：

步驟a、藻體預處理：取風干后的藻體剔除雜物，在40-50oC溫度條件下烘干，碾磨過篩，得到藻體粉末；

步驟b、藻體索氏提取:將藻體粉末置于索式提取器中，依次用乙醚、丙酮、95%乙醇、二氧雜環己烷和去離子水為提取液進行索氏提取，所得固體標記為索提藻體；

步驟c、藻體氯化鈣及酸洗：用氯化鈣溶液連續三次提取索提藻體，每次提取時均保持固液比為1：10，在40-60oC條件下連續攪拌15-40min后，離心得到固體，標記為氯化鈣處理藻體；

用鹽酸溶液連續三次提取氯化鈣處理藻體，每次提取時均保持固液比為1：10，連續攪拌10-30min后，離心得到固體，標記為鹽酸處理藻體；

向鹽酸處理藻體中加入去離子水，使固液比達到1：10，連續攪拌10-30min后，離心得到固體，標記為水洗鹽酸處理藻體；

步驟d、藻體碳酸鈉處理：用碳酸鈉溶液連續三次提取水洗鹽酸處理藻體，每次提取時均保持固液比為1：10，在30-45oC條件下連續攪拌30-50min后，離心得到固體，標記為碳酸鈉處理藻體；