[發明專利]一種基于毛細管電泳快速檢測谷胱甘肽濃度的方法

有效

• 申請號: 201510560771.0
• 申請日: 2015-09-06
• 公開（公告）號: CN105241942B
• 公開（公告）日: 2018-01-02
• 發明（設計）人: 王建浩;李進晨;柴宏;張晨澄;陳瑤;滕一萬;蔣鵬舉;邱琳;王車禮;顧亞琴;楊麗;樊杰;董冰玉
• 申請（專利權）人: 常州大學
• 主分類號: C12Q1/00
• 分類號: C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及納米生物技術領域，具體涉及一種基于毛細管電泳快速檢測谷胱甘肽濃度的方法。

背景技術

近年來，量子點(QDs)作為一種新型熒光材料，具有激發光譜寬、發射光譜窄而對稱、顏色可調、抗光漂白和熒光壽命長等優點。這些優點彌補了傳統熒光探針的不足，逐漸使其在生物分析檢測中得到廣泛應用。

谷胱甘肽巰基轉移酶標簽是最早使用的親和標簽，1988年D.B.Smioth和K.S.John-son設計了以GST為融合表達標簽的pGEX原核表達載體，成功地運用于寄生蟲抗原蛋白的克隆表達親和純化。用于親和純化的GST來源于日本血吸蟲，相對分子質量為26×10³，與其配體還原性谷光氨肽(GSH)的親和常數為(0.43±0.07)mmol/L，由于GST和谷胱甘肽的親和力適中，非常適合作為親和標簽。

另一方面，毛細管電泳作為一種高分辨率、高靈敏、高通量及低樣品消耗的微分離技術，在生物分析領域具有廣闊的應用前景。同時，通過將熒光檢測與毛細管電泳相結合，大大提高了檢測限，拓展了毛細管的應用。且毛細管內的方法相對毛細管外的方法更靈敏、更迅速、樣品消耗更低。

檢測谷胱甘肽濃度的常用方法有分光光度法、熒光法和放射性核素法等，但這些方法操作繁瑣、耗費的樣品多，在微量樣品的檢測方面有很大的局限性。

本方法通過谷胱甘肽與量子點生物探針在毛細管內相互作用的峰面積比的變化，繪制變化曲線，可以準確、快速、靈敏的檢測谷胱甘肽濃度的方法，操作簡單，可重復性高，進一步拓展了量子點探針在生物分析領域的應用。

發明內容

本發明要解決的技術問題是現有技術中尚無良好檢測谷胱甘肽濃度檢測方法的不足，提供一種基于毛細管電泳快速檢測谷胱甘肽濃度的方法。

為解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案為，一種基于毛細管電泳快速檢測谷胱甘肽濃度的方法，步驟如下，

(1)將脂溶性QDs經不同巰基配體穩定轉換為水溶性QDs，提高QDs在水溶液中的穩定性；(2)設計含有谷胱甘肽巰基轉移酶標簽的重組蛋白，并通過大腸桿菌原核表達純化；(3)GST-HRV酶與QDs按摩爾比例10:1在毛細管內相互作用形成QD-GST-HRV量子點生物探針復合物；(4)隨后將不同摩爾濃度的谷胱甘肽溶液注入毛細管，測定復合物與總面積比和谷胱甘肽濃度的關系，繪制峰面積比-谷胱甘肽濃度(S_complex/S_total-C_GSH)變化曲線。

采用上述的技術方案后，本發明所取得的有益效果是，本發明提供一種基于毛細管電泳快速檢測谷胱甘肽濃度的方法，操作簡單，可重復性高，能方便快捷的檢測出樣品中谷胱甘肽濃度，進一步拓展了量子點探針在生物分析領域的應用。

附圖說明

圖1：GSH和QD-GST-HRV生物探針在毛細管內相互作用的電泳圖。(a)QD-GST-HRV，GSH濃度分別為；(b)，62.5mM；(c)，125mM；(d)，250mM；(e)，500mM(λ_ex＝420nm，λ_em＝565nm)。

圖2：不同濃度的谷胱甘肽溶液與量子點生物探針(QD-GST-HRV)在毛細管內相互作用的變化曲線(S_complex/S_total-C_GSH)。

具體實施方案

實施例

本發明將就以下實施例作進一步說明，但應了解的是，這些實施例僅為例示說明之用，而不應被解釋為本發明實施的限制。

實施例1

CdSe/ZnS QDs與GST-HRV在毛細管內的相互作用

1、脂溶性QDs經GSH轉換為水溶性QDs

將18mg谷胱甘肽，5mg KOH，250μL甲醇混勻，取40μL混合溶液加入200μL脂溶性量子點中，振蕩30min。振蕩結束后，加入200μL 1mM NaOH，脂溶性量子點即轉移到水相中。取出上層量子點，加入1mL甲醇與30μL NaCl(30mg/mL)沉淀，溶于硼酸緩沖液(pH 7.4，10mM)中。反復沉淀兩次，最后溶于200μL硼緩沖液(pH 7.4，10mM)中。

2、重組蛋白酶GST-HRV的克隆、表達、純化