[發明專利]一種酶活性提高的丙酮酸羧化酶突變體R485P及其應用有效
| 申請號： | 201510560217.2 | 申請日： | 2015-09-06 |
| 公開（公告）號： | CN105132388B | 公開（公告）日： | 2018-02-23 |
| 發明（設計）人： | 徐國強;蔣伶活;吳滿珍;李鵬越 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N9/00 | 分類號： | C12N9/00;C12N15/52;C12N1/19;C12P7/46;C12R1/865 |
| 代理公司： | 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙)11419 | 代理人： | 張勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 活性 提高 丙酮酸 羧化酶 突變體 r485p 及其 應用 | ||
1.一種丙酮酸羧化酶突變體，其特征在于，所述突變體是在氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的米根霉丙酮酸羧化酶的基礎上，將第485位的精氨酸突變成為脯氨酸。
2.編碼權利要求1所述突變體的基因。
3.攜帶權利要求2所述基因的載體或基因工程菌。
4.權利要求3所述的載體或基因工程菌在二元羧酸相關的食品、飼料、化工、藥物制備方面的應用。
5.應用權利要求1所述突變體生產延胡索酸的方法。
6.一種利用權利要求1所述突變體促進延胡索酸積累的方法，其特征在于，在編碼丙酮酸脫羧酶PDC1、乙醇脫氫酶ADH1和延胡索酸酶FUM1的基因同時缺失的酵母菌中，過表達編碼所述丙酮酸羧化酶突變體的基因。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述丙酮酸脫羧酶基因PDC1的核苷酸序列如Gene ID:850733所示，乙醇脫氫酶基因ADH1的核苷酸序列如Gene ID:854068所示，延胡索酸酶基因FUM1的核苷酸序列如Gene ID:855866所示。
8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，在發酵培養過程中添加生物素。
9.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，將過表達丙酮酸羧化酶突變體的三基因缺失菌株Saccharomyces cerevisiae CEN.PK2-1C△PDC1△ADH1△FUM1的種子液，接種至發酵培養基，于28-32℃、150-250rpm條件下進行培養。
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