[發明專利]P19/Ebi3復合物及其多克隆抗體在系統性紅斑狼瘡診治中的應用

有效

• 申請號: 201510555637.1
• 申請日: 2015-09-01
• 公開（公告）號: CN105085656B
• 公開（公告）日: 2018-04-27
• 發明（設計）人: 王仁喜;肖鶴;韓根成;陳國江;黎燕;沈倍奮;侯春梅;王小茜;魏寅祥;劉曉玲;張玉
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院基礎醫學研究所
• 主分類號: C07K14/54
• 分類號: C07K14/54;C12P21/02;C07K16/24;G01N33/53;A61K39/395;A61P37/02
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司11279
• 代理人: 孟祥斌,朱萍

技術領域

本發明涉及生物技術領域，更具體地，本發明涉及P19/Ebi3復合物及其多克隆抗體在系統性紅斑狼瘡診斷、治療中的用途。

背景技術

系統性紅斑狼瘡(Systemic Lupus Erythematosus,SLE)是一種嚴重威脅人類健康與生命的自身免疫性疾病，有較高的致死率和致殘率。其病因與發病機制尚不明了，普遍認為是環境因素作用于一定遺傳背景的機體(包括組織相容性、細胞因子、細胞因子受體等表達的不同型別)而形成的結果。其免疫病理特征是體內產生多種高低度、致病性自身抗體，同時淋巴細胞凋亡。釋放出大量細胞核內容物及核糖小體而成為自身抗原；抗原抗體結合形成免疫復合物，免疫復合物的沉積可導致靶細胞損傷和炎癥，導致各個組織和器官發生病變。在該病理過程中，B細胞處于高度活化狀態，且該過程與T細胞密切相關，有T細胞依賴性。

復雜的細胞因子網絡調節T細胞和B細胞的生長、分化和功能，這些細胞因子可以分為兩大類：Th1型(主要誘導細胞免疫)和Th2型(主要促進抗體產生)。白細胞介素12(IL-12)在細胞因子網絡調節中起著重要的作用，它主要由單核巨噬細胞分泌產生。IL-12家族由一個α-鏈(P19，P28或P35)和一個β-鏈(P40或Ebi3)異二聚體亞基組成(圖1)，其與一些自身免疫疾病，尤其是Th1細胞介導的自身免疫病的發病有關。

目前對于系統性紅斑狼瘡的臨床診斷主要依靠臨床表現、實驗室檢查、組織病理學和影像學檢查。由于SLE臨床表現病癥因人而異，有時會出現誤診。而治療系統性紅斑狼瘡的常規方法是使用抗瘧疾藥、抗炎藥和免疫抑制藥，當癥狀難以控制時，對非甾體抗炎劑補充以皮質激素；雖然在控制病情、阻止疾病發展中有顯著作用，但多有明顯不良反應，且對部分患者療效不佳。B細胞和T細胞在SLE的發病機制中起著重要的作用，針對免疫細胞的生物學療法將成為治療SLE的焦點。

發明內容

為了彌補現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種可用于系統性紅斑狼瘡診治的復合物P19/Ebi3及其多克隆抗體。相比傳統的系統性紅斑狼瘡的診斷和治療方法，使用多克隆抗體與導致自體抗體過度產生的病理性免疫響應相互作用或將其糾正的特異性治療將更有優勢，如具有較高的特異性與準確性，較低的副作用，從而實現治愈系統性紅斑狼瘡和/或在長期基礎上改善患者的生活品質的病因性治療。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明提供了一種分離的P19/Ebi3復合物。

進一步，上面所提到的復合物是由P19和Ebi3兩個亞基組成的。

進一步，上面所提到的P19亞基包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的蛋白，或其保守性變異蛋白。

進一步，上面所提到的Ebi3亞基包括如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的蛋白，或其保守性變異蛋白。

進一步，上面所述的亞基是由多核苷酸編碼的，所述的P19亞基的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述的Ebi3亞基的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

本發明提供了一種重組載體，它含有上面所述的多核苷酸序列。

進一步，所述的重組載體中還含有與所述的多核苷酸序列操作性相連的表達調控序列。

本發明所述攜帶基因的載體是本領域已知的各種載體，如市售的載體、包括質粒、粘粒、噬菌體、病毒等。

病毒載體可以是任何適當的載體，包括但不限于逆轉錄病毒載體、腺病毒載體、腺病毒相關病毒載體、皰疹病毒(例如單純皰疹病毒、痘苗病毒及EB病毒)載體、甲病毒載體。

真核表達載體可以是任何適當的表達載體，包括但不限于pCMV-Myc表達載體、pcDNA3.0表達載體、pcDNA3.1表達載體、pEGFP表達載體、pEFBos表達載體、pTet表達載體、pTRE表達載體、pReceiver-Lv18表達載體、pZE-LV122X表達載體或者在公知表達載體的基礎上經改造的載體，比如pBin438、pCAMBIA1301等。

優選地，所述表達載體為真核表達載體。優選地，所述真核表達載體為pReceiver-Lv18和pEZ-LV122X表達載體。

本發明提供了一種宿主細胞，它含有所述的重組載體，或其基因組中整合有所述的多核苷酸。

優選地，所述宿主細胞為CHO細胞。

本發明提供了一種P19/Ebi3復合物的制備方法，它包括下列步驟:

(a)培養所述的宿主細胞；

(b)從培養物中分離出所述的復合物。