[發明專利]乳液微流化和/或均化期間的組分循環

在審

• 申請號: 201510552611.1
• 申請日: 2010-12-03
• 公開（公告）號: CN105055311A
• 公開（公告）日: 2015-11-18
• 發明（設計）人: H·呂克利克;H·舍弗茲克;B·桑特里
• 申請（專利權）人: 諾華股份有限公司
• 主分類號: A61K9/107
• 分類號: A61K9/107;A61K39/39;A61K39/145;A61K47/34
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陶啟長

本發明專利申請是國際申請號為PCT/IB2010/003394，國際申請日為2010年12月03日，進入中國國家階段的申請號為201080062766.2，名稱為“乳液微流化和/或均化期間的組分循環”的發明專利申請的分案申請。

本申請要求2009年12月3日提交的美國臨時專利申請61/283,518的優先權，其全部內容通過引用納入本文。

技術領域

本發明涉及通過微流化制備疫苗的水包油乳液佐劑領域。

技術背景

稱作‘MF59’[1-3]的疫苗佐劑是一種鯊烯、聚山梨酯80(也稱作吐溫80)和去水山梨糖醇三油酸酯(也稱作司盤85)的亞微米水包油乳液。它也可包含檸檬酸根離子，如10mM檸檬酸鈉緩沖劑。該乳液的體積組成可以是約5％鯊烯、約0.5％吐溫80和約0.5％司盤85。參考文獻4的第10章、文獻5的第12章、文獻6的第19章更詳細地描述了該佐劑及其制備。

如參考文獻7中所述，MF59的商業規模的制備是通過將司盤85分散在鯊烯相中且吐溫80分散在水相中，然后高速混合得到粗乳液。然后將這種粗乳液重復通過微流化機，產生具有均一油滴尺寸的乳液。如文獻6所述，然后將微流化乳液濾過0.22μm膜，以除去任何大油滴，得到乳液的平均液滴尺寸在4℃下保持至少3年不變。可如文獻8所述測定最終乳液中的鯊烯含量。

水包油乳液含有油滴。這些乳液中含有的較大油滴可作為聚集的成核位置，引起儲存過程中的乳液降解。

本發明的目的是提供制備微流化水包油乳液(例如MF59)的進一步和改良方法，特別是適用于商業規模和提供改良的勻化和微流化以產生含較少大顆粒乳液的方法。

發明內容

本發明提供一種生產含有鯊烯的水包油乳液的方法，所述方法包括步驟(i)用勻漿器形成具有第一平均油滴尺寸的第一乳液，其中第一乳液是通過使第一乳液組分循環通過勻漿器多次形成的。

本發明還提供生產含鯊烯的水包油乳液的方法，該方法包括步驟：(b)微流化具有第一平均油滴尺寸的第一乳液，形成具有比第一平均油滴尺寸小的第二平均油滴尺寸的第二乳液，其中第二乳液是通過循環第二乳液組分形成的，所述循環通過將第二乳液組分從第一乳液容器經第一微流化裝置轉移到第二乳液容器，然后通過第二微流化裝置，其中第一和第二微流化裝置相同。

任選地，本發明方法包括早期步驟(a)形成具有第一平均油滴尺寸的第一乳液。

任選地，本發明方法包括步驟(c)過濾所述第二乳液。

如下文詳述，第一乳液可具有5000nm或以下的平均油滴尺寸，例如平均尺寸在為300nm-800nm。如下所述，第一乳液中尺寸>1.2μm的油滴數量可為5x10¹¹/ml或以下。尺寸>1.2μm的油滴是不利的，因為它們可由于液滴聚集和凝結而導致乳液不穩定[14]。

形成后，第一乳液可隨后至少通過一次微流化，形成平均油滴尺寸減小的第二乳液。如下所述，第二乳液中的平均油滴尺寸為500nm或以下。如下所述，第二乳液中尺寸>1.2μm的油滴數量可為5x10¹⁰/ml或以下。為了實現這些特征，必須將乳液組分通過微流化裝置多次，例如2、3、4、5、6、7次。

然后第二乳液可濾過例如親水聚醚砜膜，得到可適用作疫苗佐劑的水包油乳液。過濾后產生的水包油乳液的平均油滴尺寸可為220nm或以下，例如135-175nm，145-165nm，或約155nm。過濾后產生的水包油乳液中存在的尺寸>1.2μm的油滴數量可以是5x10⁸/ml或更少，例如5x10⁷/ml或更少，5x10⁶/ml或更少，2x10⁶/ml或更少，或5x10⁵/ml或更少。

過濾后形成的最終水包油乳液與第一乳液相比尺寸>1.2μm的油滴可少至少10²倍，理想的是至少少10³倍(例如少10⁴倍)。

在一些實施方式中，在步驟(iii)之間進行一輪以上的步驟(i)和(ii)。類似地，可多次重復獨立步驟(i)和(ii)。

通常，在20-60℃，理想地在40+5℃進行本方法。雖然第一和第二乳液組分可能在較高溫度下也相對穩定，但一些組分的熱分解仍然會發生，因此優選較低溫度。

乳液組分