[發明專利]PH450酶的大量制備方法有效
| 申請號： | 201510533850.2 | 申請日： | 2015-08-27 |
| 公開（公告）號： | CN105112378B | 公開（公告）日： | 2018-10-30 |
| 發明（設計）人： | 沃納·阿爾伯 | 申請（專利權）人： | 深圳無斑時代科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/02 | 分類號： | C12N9/02 |
| 代理公司： | 北京市中聞律師事務所 11388 | 代理人： | 王紅俊;常亞春 |
| 地址： | 廣東省深圳市南山區蛇*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | ph450 大量 制備 方法 | ||
1.一種PH450酶的大量制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
獲取藍藻并進行大量培養，并在培養過程中用PH450酶誘導劑進行誘導；
在所述大量培養結束后收集藍藻細胞，提取藍藻細胞總蛋白；
用人PH450酶作為抗原進行免疫反應，制備多克隆抗體；
以所述多克隆抗體作為親和介質制備親和層析柱；
將所述提取的藍藻細胞總蛋白于所述親和層析柱進行過柱；
所述PH450酶誘導劑包括利福平和依非韋倫；所述利福平在藍藻培養基中的濃度為0.8mmol/L；所述依非韋倫在藍藻培養基中的濃度為0.4mmol/L；所述藍藻為瑞士納沙泰爾湖水晶藍藻或“水生1042號”藍藻；
獲取所述藍藻并進行大量培養，并在培養過程中用PH450酶誘導劑進行誘導步驟中，還包括：
向藍藻培養基中添加瑞格列奈，所述瑞格列奈在藍藻培養基中的濃度為0.1mmol/L；
以所述多克隆抗體作為親和介質制備親和層析柱步驟中，所述親和層析柱采用的固相基質為Sepharose CL 4B；
將所述提取的藍藻細胞總蛋白于所述親和層析柱進行過柱步驟之前，還包括：
將所述提取的藍藻細胞總蛋白進行梯度沉降處理；
將所述提取的藍藻細胞總蛋白于所述親和層析柱進行過柱步驟之前，還包括：
將所述提取的藍藻細胞總蛋白用不含有所述多克隆抗體的空白層析柱進行過柱；
將所述提取的藍藻細胞總蛋白于所述親和層析柱進行過柱步驟之后，還包括：
用洗脫液對所述親和層析柱進行洗脫，并收集洗脫組分；
將所述洗脫組分進行濃縮處理。
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