[發(fā)明專利]一種金龜子綠僵菌MAYX130921及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510508966.0
• 申請(qǐng)日: 2015-08-19
• 公開（公告）號(hào): CN105039181A
• 公開（公告）日: 2015-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳斌;杜廣祖;張立敏;肖關(guān)麗;和淑琪;鄭亞強(qiáng);昝慶安;桂富榮;李正躍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;A01P7/04;C12R1/645
• 代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種金龜子綠僵菌(Metarhiziumanisopliae)MAYX130921及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

暗黑鰓金龜HolotrichiaparallelaMotschulsky是重要的農(nóng)業(yè)地下害蟲，其成蟲(金龜子)取食危害作物地下部葉片，幼蟲長期生活于土中取食危害植物地下根莖和塊根(莖)，引起土壤中細(xì)菌等微生物的侵染造成地下根莖腐爛。對(duì)暗黑鰓金龜幼蟲的防治方法，一度以化學(xué)防治為主，化學(xué)防治雖在一定程度降低了蠐螬的危害程度，但卻不能根治蠐螬為害，而且由于化學(xué)農(nóng)藥的不當(dāng)使用，加劇了土壤和水系污染，農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留也超標(biāo)。這些負(fù)面影響使人們?cè)诜乐沃懈雨P(guān)注起生物防治，弧麗鉤土蜂是暗黑鰓金龜幼蟲的寄生性天敵昆蟲，釋放弧麗鉤土蜂防治暗黑鰓金龜也取得了一定成效，然而由于弧麗鉤土蜂作為一種天敵昆蟲，種群繁殖周期較長，再加上其活動(dòng)性較強(qiáng)，受環(huán)境的影響較大，因此影響了大面積的推廣應(yīng)用。綠僵菌作為一類重要的昆蟲病原真菌，對(duì)人、畜、植物安全，害蟲極少或不產(chǎn)生抗性，有利于環(huán)境保護(hù)。因此，研究暗黑鰓金龜幼蟲的生物防治，避免或減少因不合理使用化學(xué)農(nóng)藥所帶來的抗藥性問題，已成為暗黑鰓金龜科學(xué)治理和可持續(xù)控制的重要選擇。

金龜子綠僵菌(Metarhiziumanisopliae)MAYX130921屬于半知菌亞門絲孢綱綠僵菌屬。據(jù)記載，金龜子綠僵菌小孢變種寄主廣泛，在生物防治中具有重要價(jià)值，而對(duì)暗黑鰓金龜幼蟲的侵染還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的在于提供一種金龜子綠僵菌MAYX130921及其應(yīng)用，旨在克服現(xiàn)有的金龜子綠僵菌未發(fā)現(xiàn)能寄生暗黑鰓金龜?shù)牟蛔悖ㄟ^生物技術(shù)手段防治暗黑鰓金龜，避免或減少因不合理使用化學(xué)農(nóng)藥所帶來的抗藥性問題。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種金龜子綠僵菌(Metarhiziumanisopliae)MAYX130921，于2014年12月4日保藏于中國微生物保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCCNo.10139，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。

本發(fā)明的進(jìn)一步的目的在于提供上述金龜子綠僵菌MAYX130921在暗黑鰓金龜防治方面的應(yīng)用。本發(fā)明于2013年9月，在云南省玉溪市峨山縣田間調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)金龜子綠僵菌在暗黑鰓金龜幼蟲中大量發(fā)生流行，引起大量暗黑鰓金龜幼蟲感染死亡。因此，該菌株是目前國內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)的寄生暗黑鰓金龜、流行性很強(qiáng)的蟲生真菌，在防治暗黑鰓金龜中具有很大的開發(fā)應(yīng)用前景。

本發(fā)明從罹病暗黑鰓金龜幼蟲上分離獲得金龜子綠僵菌野生菌株，將野生菌株回接于暗黑鰓金龜成蟲上復(fù)壯得到金龜子綠僵菌菌株，對(duì)該菌株采用按常規(guī)方法進(jìn)行單孢分離、培養(yǎng)得到純的、致病力強(qiáng)的金龜子綠僵菌。在SDAY培養(yǎng)基上，菌落絨毛狀至棉絮狀，最初時(shí)為白色，產(chǎn)孢時(shí)呈橄欖綠色。在光學(xué)顯微鏡(400倍)可以看到菌絲具分隔分枝，透明，直徑為1.5～2.0μm。分生孢子梗直徑約2μm，其末端產(chǎn)生瓶形小梗，8～16(－25)×1.5～2(2.2)μm。從瓶梗末端以向基式連續(xù)形成長串鏈的分生孢子。分生孢子單細(xì)胞，長橢圓形至圓柱狀，兩端鈍截形至鈍圓，大小變化甚大，5～7(－9)×2～3(4.5)μm。孢子單個(gè)存在時(shí)色亮，成堆時(shí)橄欖綠色，脫落的孢子常聚成菱形孢子團(tuán)塊或殼狀結(jié)構(gòu)。在SDAY培養(yǎng)基上生長較快，接種后前8天內(nèi)菌落直徑日增長0.64cm。

相比于現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)和不足，本發(fā)明具有以下有益效果：本發(fā)明是初次從暗黑鰓金龜體上分離得到的菌株，培養(yǎng)比較簡單，生長快速，產(chǎn)孢量大，孢子萌發(fā)率高。其分生孢子對(duì)暗黑鰓金龜幼蟲致病力強(qiáng)，環(huán)保無污染、不易產(chǎn)生抗藥性，可以廣泛地用于暗黑鰓金龜?shù)姆乐巍?!-- SIPO -->

具體實(shí)施方式：

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

實(shí)施例一、病原菌的分離、鑒定

1.1材料與方法

1.1.1材料

在云南省玉溪市峨山縣采集到被一種蟲生真菌侵染后的罹病暗黑

鰓金龜幼蟲。

薩氏培養(yǎng)基(SDAY)：1％蛋白胨+1％酵母粉+4％葡萄糖+1.5～2％瓊脂粉+1000ml水。

無菌操作條件：所有的器皿和用具均經(jīng)高溫滅菌鍋(121℃，30min)，接種等操作均在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。

培養(yǎng)條件：置于28℃光照(12L：12D)恒溫箱中培養(yǎng)，待菌落形成后，轉(zhuǎn)移到試管SDAY斜面，培養(yǎng)3～5天，轉(zhuǎn)入4℃冰箱儲(chǔ)存。