[發明專利]一種溶解難溶多肽的偶聯肽鏈及其在液相色譜中分離純化的應用

有效

• 申請號: 201510466145.5
• 申請日: 2015-07-31
• 公開（公告）號: CN105001307A
• 公開（公告）日: 2015-10-28
• 發明（設計）人: 周彬;查建生;康武;徐金榮;潘奕
• 申請（專利權）人: 南京斯拜科生化實業有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/16
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

技術領域

本發明涉及生物工程和多肽生產領域，具體的說涉及一種溶解難溶多肽的偶聯肽鏈及其在液相色譜中分離純化的應用。

背景技術

溶解性是研究蛋白質和多肽會遇到比較重要的問題，每個氨基酸都有其固有的化學特性。如亮氨酸、異亮氨酸、頡氨酸是疏水性的，而賴氨酸、組氨酸、精氨酸是親水性的。難溶多肽主要是其包含的難溶氨基酸引起的，一般來說，難溶氨基酸占多肽比例超過75％就會造成多肽的難溶。

在多肽生產和制備方面，難溶性一直是多肽分離純化步驟的一大難題。多肽主要的純化手段是反相高效液相色譜，其具有分離效果好，分辨率高回收率高的特點。反相高效液相色譜在對多肽進行分離純化時，需要將多肽完全溶解到溶劑中，最適合的常規溶劑為H₂O、ACN，這樣才能利用反相高效液相色譜進行有效的分離純化，但難溶多肽給廣大科研人員在該操作帶來極大麻煩。

現有解決難溶多肽純化的方法只能選擇優良的有機溶劑(如：DMSO，DMF)去溶解多肽，然后進行反相高效液相色譜分離純化。而DMF或DMSO是通過破壞多肽的二級結構助溶，會導致高效液相色譜分離效果大大降低，且對難容肽鏈的溶解能力有限。

發明內容

發明目的：本發明的目的是提供一種用于溶解難溶多肽的的偶聯肽鏈；本發明還有一個目的是提供前述偶聯肽鏈在溶解難溶多肽上的應用。

技術方案：為了實現上述發明目的，本發明的一種溶解難溶多肽的偶聯肽鏈如式(I)所示：

X-Ph-Y-(B)_n???(I)，

其中，Ph表示1,4位被取代的苯環；

X表示羥基或C1-C4的單羥基烷基；

Y表示與(B)_n發生脫水縮合反應后形成的羰基或C2～C4羰基烷基；

(B)_n表示n個相同或不同的親水氨基酸縮合組成的親水多肽鏈，n為難溶多肽氨基酸數的1.2～2倍。

具體地說，式(I)所述X為直鏈或支鏈的–CH₂OH、–CH₂CH₂OH、–CH₂CH₂CH₂OH、–CH₂CH₂CH₂CH₂OH的任意一種；所述Y為直鏈或支鏈的–CH₂CO–、–CH₂CH₂CO–或–CH₂CH₂CH₂CO–的任意一種。

X-Ph-Y原本來自于1,4位分別被單羥基烷基和單羧基烷基取代的苯環。羧基的-OH與(B)_n的氨基脫水縮合形成肽鏈，因此通式(I)的Y為直鏈或支鏈的–CH₂CO–、–CH₂CH₂CO–或–CH₂CH₂CH₂CO–的任意一種。

本發明的耦合肽鏈中，X–Ph–Y是將親水多肽鏈和難溶多肽鏈耦合的“連接臂”，該“連接臂”來自4-羥基苯甲酸、對羥甲基苯甲酸、4-(2-羥乙基)苯甲酸、4-(3-羥基丙基)苯甲酸、4-(4-羥基丁基)苯甲酸、對羥基苯乙酸、4-(羥甲基)苯乙酸、對羥基苯丙酸、3-[4-(羥基甲基)苯基]丙酸、4-(4-羥基苯基)丁酸、2-(4-羥基苯)丙酸、3-(4-羥基苯基)丁酸、2-[(4-羥基苯基)甲基]氨基丁酸、4-(1-羥基乙基)-苯甲酸的任意一種，通過脫水縮合反應與親水多肽鏈的N端連接。

另外，本發明的耦合肽鏈中，親水氨基酸包括但不限于精氨酸、賴氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、脯氨酸中的任意一種，這些氨基酸如下表1所示，疏水參數很小；而所述的難溶多肽鏈，可以理解為包含難溶氨基酸且在液相色譜中溶解度很低或難溶的多肽鏈，難溶氨基酸包括丙氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、纈氨酸、異亮氨酸的任意一種，這些氨基酸如表2所示，疏水參數大，含有這些氨基酸的多肽鏈一般溶解度都非常低。

表1?親水氨基酸列表