[發明專利]一種雌蠶絲蛋白多肽及其制備和應用

在審

• 申請號: 201510450306.1
• 申請日: 2015-07-28
• 公開（公告）號: CN104987374A
• 公開（公告）日: 2015-10-21
• 發明（設計）人: 羅瑞雪
• 申請（專利權）人: 蘇州普羅達生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12P21/06;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/16;A61K8/64;A61Q19/00;A61Q19/02
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技術領域

本發明涉及生物技術多肽制備領域，具體涉及雌蠶絲蛋白多肽制備領域。

技術背景

蠶絲廣泛應用于纖維制造業。最近的研究發現，不同性別的蠶的蠶絲蛋白其結構和化學性質不同。結果顯示，雄蠶絲的結晶度、取向度、耐熱性能、斷裂強度都較高，但雄蠶絲吸濕能力低于雌蠶絲，而在放濕過程中雄蠶絲達到平衡的時間要低于雌蠶絲。因此，當蠶絲用于纖維制造時，往往優選雄蠶絲，而大量的雌蠶絲則被丟棄，造成了浪費。

隨著蠶絲的應用領域的拓寬，蠶絲在化妝品領域的功效顯得尤為突出。由于蠶絲蛋白質分子特殊的化學結構，具有天然調濕、改善人體皮膚營養、防止皮膚起皺、增強皮膚細胞活力和彈性、促進細胞新陳代謝及維持皮膚正常生理狀態的作用。由于，化妝品與纖維制造的需求不同，化妝品需要更高的保濕效果，因此，雌蠶絲比雄蠶絲具有更好的吸濕能力和更慢的放濕過程的特點，如果應用于化妝品領域，有起到更好的保濕作用，能更有效的改善皮膚營養，恢復細胞活力和彈性。

當雌蠶絲蛋白應用于化妝品時，和普通蠶絲蛋白一樣存在分子量較大的問題。較大的分子量的蛋白往往會引起過敏反應，導致皮膚瘙癢。小分子蛋白質或多肽就不容易誘發免疫變態反應。但是，小分子蛋白質往往會失去原形蛋白質的功效。因此，如何才能讓分解后的蠶絲蛋白小分子既有原蛋白質的功效，且不引起過敏，一直是一個難以協調的問題。

發明內容

發明目的

針對現有蠶絲蛋白化妝品的現狀，發明一種雌蠶絲蛋白多肽及制備和應用，該多肽是利用雌蠶絲制備的多肽，將該多肽應用于化妝品，其與雄蠶絲蛋白和普通蠶絲蛋白相比，具有更好的保濕效果，且該多肽沒有抗原性。

技術方案

一種雌蠶絲蛋白多肽，其特征在于，序列為EEHLSAGIPGDACAAANVESGS。所述雌蠶絲蛋白多肽的制備方法，其特征在于，步驟包括(1)將清洗、烘干后的雌蠶繭100g剪碎，加入100ml去離子水中；(2)在-80℃速凍；(3)將蠶繭和水的混合物超聲、粉碎；(4)煮沸1-2小時，同時緩慢攪拌；(5)待溶液冷卻后，加入水解酶，在20-40℃反應30-60分鐘；(6)離心2000-3000rpm，5-10分鐘，取上清；(6)采用鹽析法，將蠶絲蛋白沉淀；(7)將沉淀物復溶于pH5.0-5.5緩沖液中，脫鹽；(8)采用分子篩層析技術，分離出分子量為2-3KDa的多肽，即得。

.根據權利要求書2所述雌蠶絲蛋白多肽的制備方法，其特征在于，步驟(5)中所述的水解酶是胃蛋白酶、胰蛋白酶、菠蘿蛋白酶、生姜蛋白酶或合歡蛋白酶。所述雌蠶絲蛋白多肽的制備方法，其特征在于，步驟(7)中所述的鹽析法所用的鹽為NH₄Cl。

所述雌蠶絲蛋白多肽的制備方法，其特征在于，步驟(8)中所述的緩沖液為PBS。

所述雌蠶絲蛋白多肽的制備方法，其特征在于，步驟(9)中所述的分子篩為葡聚糖凝膠。

所述的雌蠶絲蛋白多肽在制備化妝品中的應用。

本發明多肽委托上海吉爾生化合成，純度為95％。

有益效果

本發明的制備得到的雌蠶絲蛋白多肽，經蛋白質序列測定，序列為EEHLSAGIPGDACAAANVESGS，純度大于60％。實驗表明，該多肽具有保濕的作用，作用與普通蠶絲蛋白和雄蠶絲蛋白相比，效果更好。抗原實驗結果表明，該多肽沒有抗原性。

具體實施方式

實施例1

將清洗、烘干后的雌蠶繭100g剪碎，加入100ml去離子水中；在-80℃速凍；將蠶繭和水的混合物超聲、粉碎；煮沸1小時，同時緩慢攪拌；待溶液冷卻后，加入生姜蛋白酶，在室溫反應60分鐘；離心3000rpm，5-10分鐘，取上清；在上清中加入NH4Cl，將蠶絲蛋白沉淀，離心，得沉淀物；將沉淀物復溶于pH5.0-5.5緩沖液中，透析脫鹽；采用分子篩層析技術，分離出分子量為2-3KDa的多肽，即得。采用固相蛋白質自動測序儀測定該多肽的序列為EEHLSAGIPGDACAAANVESGS，純度為75.6％。

實施例2