[發(fā)明專利]高效液相色譜法檢測(cè)泰諾福韋光學(xué)對(duì)映體的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510423523.1
• 申請(qǐng)日: 2015-07-17
• 公開（公告）號(hào): CN105021730A
• 公開（公告）日: 2015-11-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊玉平;鄭裕義;張桂菊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江西富祥藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 杭州天勤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 黃燕

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于有機(jī)物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體是涉及一種高效液相色譜法檢測(cè)泰諾福韋光學(xué)對(duì)映體的方法。

背景技術(shù)

泰諾福韋(Tenofovir?CAS147127-20-6)為人工合成的核苷酸類似物，其化學(xué)名為(R)-9-(2-磷酸甲氧基丙基)-腺嘌呤；分子式：C₉H₁₄N₅O₄P，分子量：287.21，是一種核苷類抗病毒藥物，結(jié)構(gòu)如下：

泰諾福韋是一種無環(huán)核苷類抗病毒藥物，具有抑制HBV多酶聚和HIV逆轉(zhuǎn)錄酶的作用，泰諾福韋的活性成分泰諾福韋雙磷酸鹽可通過直接競(jìng)爭(zhēng)性地與天然脫氧核糖底物相結(jié)合而抑制病毒聚合酶，及通過插入DNA中終止鏈。

目前關(guān)于泰諾福韋的合成報(bào)道較多，例如，公開號(hào)為CN?103864847A的專利文獻(xiàn)公開了一種制備泰諾福韋的工藝，以腺嘌呤、(R)-碳酸丙烯酯及對(duì)甲苯磺酰氧甲基膦酸二酯為原料，采用一鍋法工藝制得中間體2，繼而通過無機(jī)酸水解中間體2制得泰諾福韋。公開號(hào)為CN?102295660A的專利文獻(xiàn)公開了一種泰諾福韋的合成工藝，以天然的(R)-乳酸酯為起始原料經(jīng)過還原得到手性的R-1,2-丙二醇，然后在堿的作用下酯化得到R-碳酸丙烯酯，然后腺嘌呤和R-碳酸丙烯酯制得R-9-(2-羥基丙基)腺嘌呤，其與對(duì)甲苯磺酰氧基磷酸二乙酯進(jìn)行縮合反應(yīng)，水解得到泰諾福韋。這些文獻(xiàn)中，對(duì)如何檢測(cè)泰諾福韋的HPLC純度沒有具體說明。

目前還沒有關(guān)于泰諾福韋純度檢測(cè)方法的具體報(bào)道。相關(guān)的文獻(xiàn)主要有：

公開號(hào)為CN?102040626A的專利文獻(xiàn)公開了一種泰諾福韋單酯的檢測(cè)方法，其針對(duì)的檢測(cè)對(duì)象為泰諾福韋單酯，其結(jié)構(gòu)如下：

公開號(hào)為CN?103336067A的專利文獻(xiàn)公開了一種檢測(cè)替諾福韋二乙酯含量的高效液相檢測(cè)方法，其檢測(cè)對(duì)象為替諾福韋二乙酯，其結(jié)構(gòu)如下：

泰諾福韋合成過程中，會(huì)產(chǎn)生泰諾福韋的S構(gòu)型雜質(zhì)，采用上述方法以及其他現(xiàn)有的方法，均無法實(shí)現(xiàn)S構(gòu)型和R構(gòu)型的分離，無法實(shí)現(xiàn)對(duì)R型泰諾福韋光學(xué)純度的檢測(cè)。雖然很多光學(xué)對(duì)映異構(gòu)體通過高效液相色譜法分離的方法是已知的，但流動(dòng)相、溶劑、柱溫、色譜柱、檢測(cè)器等因素直接影響拆分結(jié)果，且不適用泰諾福韋的檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種高效液相色譜法檢測(cè)泰諾福韋光學(xué)對(duì)映體的方法，該方法同時(shí)可以快速檢測(cè)泰諾福韋中R構(gòu)型和S構(gòu)型的含量，實(shí)現(xiàn)對(duì)泰諾福韋產(chǎn)品光學(xué)純度的控制。

一種高效液相色譜法檢測(cè)泰諾福韋光學(xué)對(duì)映體的方法，采用如下色譜條件：

色譜柱：以C18為鍵合相的惰性硅膠為固定相；

流動(dòng)相：L-苯丙氨酸、五水硫酸銅、磷酸二氫銨、水-乙腈混合溶劑；

流速：0.5～1.5mL/min；

檢測(cè)波長：190～400nm全波段掃描；

柱溫：20～40℃；

進(jìn)樣量：5～15μL；

檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器。

下面為在上述方案基礎(chǔ)上的優(yōu)選的方案：

作為優(yōu)選，所述色譜柱為BDS?hypersil?C18，規(guī)格為4.6×100mm，5.0μm；

作為優(yōu)選，所述流動(dòng)相中，水-乙腈混合溶劑的體積為1000ml時(shí)，L-苯丙氨酸、五水硫酸銅、磷酸二氫銨的加入量分別為：L-苯丙氨酸0.5～0.8g；五水硫酸銅0.3～0.6g；磷酸二氫銨2～2.5g；進(jìn)一步優(yōu)選的方案為：L-苯丙氨酸0.63g；五水硫酸銅0.47g；磷酸二氫銨2.21g；水-乙腈混合溶劑中水與乙腈的體積比優(yōu)選為900:100～980:20，進(jìn)一步優(yōu)選為960:40。

作為優(yōu)選，所述流速優(yōu)選為0.5～0.8mL/min。流動(dòng)相流速進(jìn)一步優(yōu)選為0.6mL/min。

作為優(yōu)選，所述檢測(cè)波長優(yōu)選為274nm。

作為優(yōu)選，所述柱溫優(yōu)選為20～30℃，進(jìn)一步優(yōu)選為25℃。

作為優(yōu)選，進(jìn)樣量?jī)?yōu)選為10μL。