[發明專利]一種汞-IgA螯合物及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201510412223.3
• 申請日: 2015-07-14
• 公開（公告）號: CN104987408A
• 公開（公告）日: 2015-10-21
• 發明（設計）人: 張積仁;陽帆;董欣敏;吳婧;蔡睿;孫遙;趙乙木
• 申請（專利權）人: 上海拜豪生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;G01N33/68;G01N33/96
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 湯喜友

1.一種汞-IgA螯合物，其特征在于，汞離子與IgA通過巰基或/和半胱氨酸殘基螯合而成。

2.一種如權利要求1所述的汞-IgA螯合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

A）汞與IgA的螯合反應：在提純源于人體的IgA或按照生物學方法重組的IgA中加入汞離子進行螯合反應，得到反應溶液；

B）純化汞-IgA螯合物的提取：采用免疫親和層析法，去除反應溶液中未反應的IgA以及多余的汞離子，即得汞-IgA螯合物。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，

所述步驟B）具體如下：

（1）溶解樣品：向經過步驟A）得到的反應溶液中加入生理鹽水使汞-IgA螯合物復溶；

（2）平衡層析柱：使用稀釋緩沖液沖洗層析柱的管路，在層析柱中裝入能與IgA特異性結合的填料，裝柱后，繼續使用稀釋緩沖液平衡層析柱；

（3）上樣：待層析柱平衡后，用稀釋緩沖液稀釋步驟（1）中樣品，然后上柱，IgA與填料特異性結合；

（4）洗脫：使用稀釋緩沖液沖洗層析柱至基線平衡，然后使用0.05-0.1mol/L的磷酸鹽溶液進行洗脫，得到洗脫液Ⅰ；

（5）收集：收集洗脫液Ⅰ；

（6）透析：將步驟（5）中的收集的洗脫液，裝透析袋，用ddH₂O透析除鹽，換水三次后，4℃透析過夜，收集樣本；

（7）平衡層析柱：采用新的層析柱，用稀釋緩沖液沖洗管路，在該層析柱中裝入能與汞特異性結合的填料，裝柱后再用稀釋緩沖液平衡層析柱；

（8）上樣：待層析柱平衡后，用稀釋緩沖液稀釋步驟（6）中樣本，然后上柱；

（9）洗脫：使用稀釋緩沖液沖洗層析柱至基線平衡，然后使用0.5-1.0mol/L的磷酸鹽溶液進行洗脫，得到洗脫液Ⅱ；

（10）收集：收集洗脫液Ⅱ；

（11）透析：將步驟（10）中的收集的洗脫液，裝透析袋，用ddH₂O透析除鹽，換水三次后，4℃透析過夜，收集樣本，即得汞-IgA螯合物。

4.根據權利要求2所述的汞-IgA螯合物的制備方法，其特征在于，還包括步驟C）：對汞-IgA螯合物的鑒定；

其中，步驟C）中具體如下：

（1）制備膠床：以瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠中的一種作為介質制備膠床；

（2）加樣：取步驟B）中提取純化得到的汞-IgA螯合物，加入稀釋緩沖液，并混勻，然后加樣于樣品槽中；

（3）電泳：連接電泳板，進行電泳；

（4）檢測：在膠床上找出含汞的蛋白條帶，將該蛋白條帶取出并溶解，然后再采用ELISA法或ICP-MS法或AAS法檢測是否含有汞以及檢測汞的含量。

5.一種如權利要求1所述的汞-IgA螯合物在制備檢測血樣中汞-IgA螯合物的試劑或試劑盒中的應用。

6.一種至少包括如權利要求1所述的汞-IgA螯合物作為標準品的試劑盒。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，還包括包被液，該包被液含有捕獲IgA的物質或捕獲汞的物質。

8.一種定量檢測汞-IgA螯合物的方法，其特征在于，以已知含量的權利要求1所述的汞-IgA螯合物作為標準品，采用以下方法之一對樣品進行檢測：酶聯免疫法、酶聯免疫與原子吸收光譜結合法、酶聯免疫與電感耦合等離子體質譜結合法、提純汞-IgA螯合物與酶聯免疫結合法、提純汞-IgA螯合物與原子吸收光譜結合法、提純汞-IgA螯合物與電感耦合等離子體質譜結合法、電泳與酶聯免疫或原子吸收光譜或電感耦合等離子體質譜結合法。