[發明專利]一種固定化單寧酶的制備方法

在審

• 申請號: 201510380655.0
• 申請日: 2015-07-02
• 公開（公告）號: CN105039298A
• 公開（公告）日: 2015-11-11
• 發明（設計）人: 曹庸;張帥;朱華偉;農嘉依;林健輝
• 申請（專利權）人: 曹庸
• 主分類號: C12N11/08
• 分類號: C12N11/08
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種固定化單寧酶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）先用無水乙醇振蕩浸泡樹脂1-3h,濾出樹脂后再用丙酮振蕩浸泡1-3h，把樹脂濾出來后用蒸餾水振蕩沖洗樹脂至丙酮殘留，備用；

（2）將單寧酶粗酶液于4000-5000r/min離心10min，取上清液進行超濾濃縮，濃縮液為超濾酶液；

（3）將步驟（1）處理后的樹脂浸于戊二醛水溶液中使樹脂充分交聯，濾出樹脂后加入到含超濾酶液的PBS緩沖液中，室溫下攪拌使樹脂充分吸附酶，濾出固體顆粒即為固定化單寧酶，4℃保藏。

2.根據權利要求1所述的固定化單寧酶的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，所述樹脂為交鏈苯乙烯型非極性大孔吸附樹脂，孔容為3mL/g，孔徑為120?，比表面積為550m²/g。

3.根據權利要求1所述的固定化單寧酶的制備方法，其特征在于，步驟（2）中，所述超濾所用纖維膜的切割分子量為10-20kDa，上清液超濾后濃縮4-6倍。

4.根據權利要求1所述的固定化單寧酶的制備方法，其特征在于，步驟（3）中，所述戊二醛水溶液濃度為1%-5%，交聯時間為2-6h。

5.根據權利要求1所述的固定化單寧酶的制備方法，其特征在于，步驟（3）中，所述PBS緩沖液濃度為0.01-0.1mol/L，超濾酶液與PBS緩沖液體積比為0.001-0.01。

6.根據權利要求1所述的固定化單寧酶的制備方法，其特征在于，所述樹脂投量和混合溶液的質量體積比為3%-6%，吸附時間為4-8h。

7.根據權利要求1所述的固定化單寧酶的制備方法，其特征在于，步驟（3）中，所述PBS緩沖液配制的配制方法為：先配制A液和B液：稱取7.16gNa₂HPO_4·12H₂O，蒸餾水定容于100mL，濃度為0.2mol/L，制得A液；稱取3.12gNaH₂PO_4·2H₂O，蒸餾水定容于100mL，濃度為0.2mol/L，制得B液；取19mLA液和81mLB液混合，即得0.2mol/L的PBS緩沖液，再稀釋可得0.01-0.1mol/L的PBS緩沖液。