[發明專利]單純皰疹病毒性角膜炎疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201510362141.2
• 申請日: 2015-06-26
• 公開（公告）號: CN105031640B
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發明（設計）人: 胡凱
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: A61K39/245
• 分類號: A61K39/245;A61K48/00;A61K39/395;A61K39/39;A61K47/36;C12N15/66;C12N15/70;A61P31/22;A61P27/02
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標事務所(普通合伙)32249
• 代理人: 陳國強

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，本發明涉及一種單純皰疹病毒性角膜炎疫苗及其制備方法。

背景技術

單純皰疹病毒性角膜炎(herpes simplex keratitis,HSK)是主要由HSV-1型感染眼部所引起的角膜炎，占角膜病的首位，因其高復發率、高致盲率而被國內外公認為最常見的致盲眼病之一。據調查，在我國，角膜盲是僅次于白內障盲居第二位，而HSK盲為角膜盲首位，約占42.85％；在發達國家的發病率為每年5.9/10⁵～20.7/10⁵，患病率為149/10⁵。HSV-1初次感染后往往引起眼瞼炎及角膜結膜炎，并且病毒易潛伏在局部神經節，主要為三叉神經節(TG)，日后當免疫功能低下，如感冒、勞累、不恰當地應用皮質內固醇激素以及免疫抑制劑時，會導致病毒被從新激活，產生復發性的HSK。有學者統計，其3年的復發率可達到33.5％。近年來，由于抗生素和皮質類固醇的廣泛應用，HSK發病率有逐漸增高趨勢。

針對HSV-1疫苗的研究經歷了較長的歷史過程，早在20世紀20、30年代就制成了滅活全病毒疫苗。現在的HSV-1疫苗有多種形式，如肽或蛋白質疫苗、減毒活疫苗、亞單位疫苗、復制缺陷型病毒、重組載體疫苗、DNA疫苗等，到目前為止，雖有部分疫苗進行了臨床試驗，但結果均不理想，所以至今尚無有效疫苗應用于臨床，研制新型的抗HSV-1的疫苗將是今后研究的重點。

HSK在感染的情況下，病毒并不能被徹底的殺滅，追其主要原因，是HSV-1自身具備免疫逃逸，影響了主要組織相容性復合體類(MHC)分子介導的病毒抗原的有效遞呈，從而不能誘導持久高效的免疫反應，故增強機體對病毒抗原的有效遞呈是治療HSK的關鍵。機體中存在一類專職行使抗原遞呈作用的細胞，被稱為專職抗原遞呈細胞(APC)，而樹突狀細胞(DC)是目前體內已知的功能最強的抗原遞呈細胞，其能夠刺激初始T細胞增殖進而啟動機體免疫應答，而巨噬細胞或B淋巴細胞僅能刺激已活化的或記憶性T細胞，故DC在誘導抗原特異性免疫反應中起著重要作用。靶向DC的疫苗是近來發展的新型疫苗，其是通過將外源目的抗原分子體內表達后靶向于DC表面的特異性受體，此受體能介導抗原分子的加工處理以及遞呈給T細胞，從而顯著增強DC的抗原遞呈，提高免疫的功效。DEC-205是其中主要采用的受體之一，因它是較特異性地表達于DC表面并是介導抗原遞呈的主要分子之一。NLDC-145是針對小鼠DEC-205的單克隆抗體，有文獻報道了其的序列，此為開展靶向DC的DNA疫苗研究提供了便利。

不同的疫苗接種途徑所致的免疫效果也有差異。HSK是一種眼表粘膜感染性疾病。可采取眼表黏膜接種疫苗。納米技術已經應用于DNA疫苗，納米粒子具有直徑小、作用時間長、緩慢釋放及提高生物利用度的特性。納米疫苗粘膜免疫接種可以增加抗原遞呈，減緩抗原釋放，并能激活APCs和抗原特異性T細胞，提高粘膜免疫水平，在眼表給藥系統中發揮了其潛在的優勢。

發明內容

針對上述背景技術中存在的問題，本發明的目的是提供一種單純皰疹病毒性角膜炎疫苗，以安全有效地防治單純皰疹病毒性角膜炎。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種單純皰疹病毒性角膜炎疫苗，由質粒pRSC-NLDC145*gD-IL-21構成,采用納米材料殼聚糖包裹；其中：gD為單純皰疹病毒I型的主要包膜糖蛋白之一，采用胞外區基因組，NLDC-145是針對小鼠DEC-205的單克隆抗體，IL-21為免疫佐劑。

所述質粒pRSC-NLDC145*gD-IL-21的濃度為5μg/μl。

本發明的另一個目的是提供一種制備上述單純皰疹病毒性角膜炎疫苗的方法，其技術方案為：

一種單純皰疹病毒性角膜炎疫苗的方法，包括如下步驟：

(1)HSV-1gD；NLDC145基因的獲取；

(2)pRSC-NLDC145*gD-IL-21質粒的構建；

(3)制備殼聚糖/質粒DNA納米疫苗。

進一步的，所述步驟(1)包括：

(1a)細胞和病毒的培養；

(1b)HSV-1基因組DNA的提取；