[發明專利]一種脆弱類桿菌選擇培養基

在審

• 申請號: 201510343214.3
• 申請日: 2015-06-19
• 公開（公告）號: CN104862370A
• 公開（公告）日: 2015-08-26
• 發明（設計）人: 鐘偉萍
• 申請（專利權）人: 鐘偉萍
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及微生物檢驗領域，具體涉及一種脆弱類桿菌培養基。

背景技術

脆弱類桿菌（Bacterooides?Fragilis，BF）為革蘭陰性短桿菌有莢膜，無芽胞，部分有菌毛，專性厭氧。BF是人體正常菌群的組成部分，也是臨床上重要的條件致病菌，可引起人體很多部位感染，感染癥狀遍及臨床各科，檢出率高，占臨床厭氧菌分離株的25%、類桿菌分離株的50%，其中腹瀉患者BF分離率達9.2%~26.8%。

BF的臨床測定主要為PCR和細胞培養，PCR的敏感度高，5小時既可以獲得結果，具有快速和敏感的特性，但是存在以下缺陷：①糞便標本中含有PCR抑制物，易造成假陰性結果；②需要復雜的實驗條件，費用較高。而細胞培養是BF目前最可靠的檢驗方法，但BF的專性厭氧和苛養性質，導致其培養時間較長，在絕對無氧的情況下，使用2d開始有個別樣本開始生長，7d無陽性菌落出現方能達到陰性檢驗標準。由于鑒定時間長，所以上述的檢驗很難指導臨床治療，延誤時機。目前BF培養的使用的培養基多為膽汁七葉苷（BBE）瓊脂，其成分含有膽汁，膽汁用以抑制對之敏感的厭氧菌，只有耐膽汁的脆弱類桿菌和可變梭桿菌、死亡梭桿菌不被抑制，從而起到選擇性培養的目的。但是BBE培養基存在下述缺陷：①不能抑制可變梭桿菌、死亡梭桿菌的生長；②對于需氧菌和兼性厭氧菌的滅殺效果不了，因此要加入慶大霉素100mg/L，但慶大霉素對于BF同樣產生微弱的抑制作業，導致其生長緩慢；③如果不加入慶大霉素，就需要嚴格的無氧環境，由于基層醫院檢驗科大多缺乏絕對無氧檢驗設備，因此大多用“厭氧缸培養法”，所謂的厭氧缸即干燥缸，通過物理化學的方法耗盡缸內氧氣，造成厭氧環境。厭氧缸法的氧氣耗盡需要時間，影響了專性厭氧桿菌BF的生長和分離。

故尋找一種新的培養基，能夠在“厭氧缸培養”的環境下快速檢測，對于基層臨床醫院尤為重要。

發明內容

本發明的技術任務是針對以上現有技術的不足，提供一種適合于糞便標本的脆弱類桿菌生長的選擇培養基。

本發明解決其技術問題的技術方案是：一種脆弱類桿菌選擇培養基，其特征在于，每升培養基中含有：胰酪蛋白胨10.0g；葡萄糖2.0g；酵母粉5.0g；氯化鈉5.0g；瓊脂15.0g；升麻甙3g；豬膽粉20g；纈氨酸0.1g；無菌小牛血清100ml；蒸餾水加至1000ml。

上述培養基的制備方法為：稱取胰酪蛋白胨；葡萄糖；酵母粉；氯化鈉；瓊脂；升麻甙；豬膽粉；纈氨酸，用蒸餾水溶解、混勻，121℃下滅菌15min，冷卻到45℃，加入無菌小牛血清混勻，滅菌蒸餾水定容到1000ml后分裝。

本發明與現有技術相比較，具有檢出可靠、脆弱類桿菌分離率高的特點。

1、所述的胰酪蛋白胨含有多種糖類、氨基酸、維生素和微量元素為脆弱類桿菌生長提供能量，葡萄糖提供碳源，酵母粉富含蛋白質、氨基酸、多肽、核苷酸、維生素、生長因子、微量元素等營養成分，促進脆弱類桿菌的繁殖和生長；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂為培養基的凝固劑；

2、纈氨酸為厭氧菌營養劑；L-高精氨酸為激活劑，促進纈氨酸的吸收；γ-氨基丁酸為營養增強劑，促進脆弱類桿菌生長。

3、豬膽粉和升麻甙（Cimicifugoside）的使用：豬膽粉中的膽汁成分用以抑制對之敏感的厭氧菌，而升麻甙用以分離脆弱類桿菌和可變梭桿菌、死亡梭桿菌，其分離作用在于可以選擇性抑制厭氧梭桿菌屬核苷透膜轉運，作用途徑為梭桿菌屬細胞壁上的外膜蛋白OMP和fadA黏附蛋白，而由于脆弱類桿菌無上述特異性蛋白，因此升麻甙對于脆弱類桿菌無殺滅作用。基礎實驗證實：將脆弱類桿菌和可變梭桿菌、死亡梭桿菌菌株分別接種到含有3g/L升麻甙的膽汁瓊脂培養基和普通膽汁瓊脂培養基，于37℃厭氧培養7d，脆弱類桿菌陽性檢出率100%，而可變梭桿菌、死亡梭桿菌菌株陽性檢出率為0%。由此證實，升麻甙對于可變梭桿菌、死亡梭桿菌具有較好的滅菌作用，且對于脆弱類桿菌無明顯影響。