[發明專利]一種馬藍組培快繁的方法

無效

• 申請號: 201510318287.7
• 申請日: 2015-06-11
• 公開（公告）號: CN104982330A
• 公開（公告）日: 2015-10-21
• 發明（設計）人: 劉祖英
• 申請（專利權）人: 劉祖英
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 玉林市振盛專利商標代理事務所 45109
• 代理人: 吳安儀

技術領域

????本發明涉及農業生物技術中植物組織培養的方法，具體地說，涉及一種馬藍組培快繁的方法。

背景技術

馬藍（Strobilanthes?cusia），別名南板藍、大青、山青、山藍、青黛、靛藍、藍靛葉等，屬于爵床科馬藍屬的多年生草本植物。馬藍在浙江、江西、湖南、福建、廣東、廣西、四川、云南等省區都有分布，其野生資源分布較分散，植株群落之間呈零星的分布狀態,存在著逐漸消失的危險。馬藍整株植株都具有較高藥用價值，富含生物堿、木質素、五環三萜、喹唑酮類等化合物，具有抗炎、抗病毒、抗腫瘤、抑菌、保肝功能，并且在臨床應用屮取得了很好的治療效果。同吋，馬藍作為一種耐陰生的常綠植物，其花色為紫色,開花時間為少花的秋冬季節,可以作為一種耐陰的地被植物在園林中應用。

由于對馬藍的藥用價值的開發和利用,馬藍的野生資源在逐漸減少,雖然目前已存越來越多的人工種植,而主要采取的繁殖方式為種子繁殖和扦插繁殖,遠遠滿足不了市場對其需求。且隨著采用扦插繁殖的代數增加,植株的優良性狀和品質會有很大降低。植物組培快繁技術能夠在短時間內快速大量繁殖,并獲得基因型一致的優良種苗,大大加快育苗進程。目前關于馬藍組織培養方面的研究鮮有報道，本發明以馬藍帶腋芽的莖段為外植體，經過芽誘導、增殖、壯苗、生根以及煉苗移栽等步驟建立了建立了馬藍組織培養快繁技術體系，為馬藍組培的進一步工廠化育苗提供技術支撐,并為以后馬藍的遺傳轉化和品種改良等奠定基礎。

發明內容

????本發明的目的在于提供出一種馬藍組培快繁的方法，本發明以馬藍帶腋芽的莖段為外植體，經過芽誘導、增殖、壯苗、生根以及煉苗移栽等步驟建立了建立了馬藍組織培養快繁技術體系，從而實現了本發明的目的。

?本發明的一種馬藍組培快繁的方法，包括以下的步驟：

（1）誘導培養：采取當年生的腋芽的莖段為外植體,淸水洗去表面附著物后,洗衣服液浸泡5～15min,然后流水沖洗1～3h，在超凈工作臺中用75%乙醇消毒30～60s后用無菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液（加2～3滴吐溫）消毒10～25min，用無菌水沖洗4～6次后用無菌濾紙吸去水分后接種到誘導培養基中進行叢生芽誘導培養。接種后先在25～28℃條件下全暗培養7～14天，然后置于每天光照12～16小時，光照強度為2000～3000lx，置于培養溫度為25～28℃的條件下培養直至形成叢生芽。

???（2）增殖培養：將步驟（1）培養得到的叢生長至1～2cm高時，從基部切取芽并轉入增殖培養基上進行繼代培養，接種后先在25～28℃條件下全暗培養1～3天，然后置于每天光照12～16小時，光照強度為2000～3000lx，置于培養溫度為25～28℃的條件下培養，30天繼代一次。

（3）壯苗培養：將步驟（2）培養30天后的叢生長轉接至壯苗培養基中進行壯苗培養，接種后每天光照14～16小時，光照強度為3000～5000lx，培養溫度為25～28℃的條件下培養。

???（4）生根培養：將步驟（3）的叢生芽長至3～4cm高時，切割成單芽并接種到生根培養基上進行生根培養，接種后先在25～28℃條件下全暗培養1～3天，然后置于每天光照14～16小時，光照強度為3000～5000lx，培養溫度為25～28℃的條件下培養至生根。

（5）煉苗移栽：將高約5～6cm的生根試管苗的培養瓶蓋半開煉苗3～5天，再全開瓶蓋加入適量的自來水并置于自然光照下煉苗5～7天，將試管苗從培養瓶中取出，洗掉根部培養基，栽入由泥炭土:黃沙泥=2:1混合成的基質中并定植于大田中。

????上述步驟（1）所述的誘導培養基為：MS+1.0～3.0mg/LKT+0.01～0.3mg/LIBA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

????上述步驟（2）所述的增殖培養基為：MS+0.1～1.0mg/L6-BA+0.5～1.0mg/L?IBA+1.0～3.0mg/L?KT+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

上述步驟（3）所述的壯苗培養基為：MS+0.5～1.5mg/L?IBA?+0.1～1.0g/L?GA₃+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。