[發(fā)明專利]一種胸腔積液標(biāo)本巴西諾卡氏菌選擇培養(yǎng)基在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201510300065.2 | 申請(qǐng)日： | 2015-06-04 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN104830954A | 公開（公告）日： | 2015-08-12 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 辛本勤 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 辛本勤 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/04 | 分類號(hào)： | C12Q1/04 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 276800 山東省*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 胸腔 積液 標(biāo)本 巴西 諾卡氏菌 選擇 培養(yǎng)基 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及檢驗(yàn)微生物培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種用于胸腔積液標(biāo)本的巴西諾卡氏菌選擇培養(yǎng)基。
背景技術(shù)
微生物培養(yǎng)是一種用人工方法使微生物生長繁殖的技術(shù)，而選擇性培養(yǎng)基是用來促進(jìn)或抑制一定類型的生物體（如細(xì)胞或細(xì)菌等）而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，利用這種培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。巴西諾卡氏菌(N.braziliensis)是需氧土壤腐生菌，屬于諾卡氏菌屬，放線菌門，該菌廣泛存在于空氣、塵埃、土壤和家畜體表，巴西諾卡氏菌毒性較強(qiáng)，致病力強(qiáng)，可引起暴發(fā)流行，多通過呼吸系統(tǒng)或原發(fā)感染,引起皮下組織及肺、腦等部位的慢性化膿性感染。巴西諾卡氏菌通過損傷的皮膚侵犯皮下組織，直接污染傷口,產(chǎn)生慢性化膿性肉芽腫，表現(xiàn)為腫脹、膿腫以及多發(fā)性瘺管，如足和腿部的所謂足分枝菌病，臨床可表現(xiàn)為急性、亞急性或慢性過程，癥狀上與肺結(jié)核、皮膚結(jié)核、放線菌病、分枝菌病相似很容易誤診。
近年來，巴西諾卡氏菌病已不罕見，在有或無免疫異常的人群中均可發(fā)生。巴西諾卡氏菌生長緩慢、病程長，雖然發(fā)病率只有1%，但是死亡率卻高達(dá)86%，早期診斷并時(shí)恰當(dāng)?shù)闹委煟梢?00%治愈，因此作為確診唯一依據(jù)的臨床細(xì)菌檢查的正確與快速鑒定極為重要。目前，該菌屬的鑒定金標(biāo)準(zhǔn)為PCR鑒定，但是PCR檢測設(shè)備要求和操作成本均較高，因此臨床培養(yǎng)多用普通血瓊脂培養(yǎng)板（BAP）培養(yǎng)。而巴西諾卡氏菌屬于苛養(yǎng)菌，即對(duì)生長環(huán)境、營養(yǎng)要求較苛刻的細(xì)菌，在普通環(huán)境中不能或難以生長。巴西諾卡氏菌初代培養(yǎng)生長緩慢，胸腔積液標(biāo)本在血瓊脂培養(yǎng)基上很容易被白色假絲酵母菌，金黃色葡萄球菌等真菌、雜菌覆蓋，巴西諾卡菌無法生長，陽性率低，使用傳統(tǒng)方法實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)48小時(shí)造成有60%巴西諾卡氏菌漏檢，培養(yǎng)96小時(shí)以上陽性表現(xiàn)，1周左右方能較準(zhǔn)確地做出鑒定，生化鑒定需要4~6周時(shí)間，結(jié)果延誤時(shí)間，造成多處病灶轉(zhuǎn)移，病死率升高。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是針對(duì)以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種適合于胸腔積液標(biāo)本巴西諾卡氏菌生長的選擇培養(yǎng)基。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題的技術(shù)方案是：一種胸腔積液標(biāo)本巴西諾卡氏菌選擇培養(yǎng)基，其特征在于，配制1000ml培養(yǎng)基的配方中含有：
牛肝粉5.0～15.0g；
麥芽浸粉2.0～5.0g；
酵母浸出粉5.0～10.0g；
氯化鈉5.0g；
瓊脂15.0～20.0g?；
乳酸亞鐵0.01～0.05g；
葡萄糖酸鋅鈣0.01～0.05g；
萘啶酮酸0.01～0.05g；
毛子草酮0.001～0.005g；
天冬酰胺0.01～0.1g；
無菌脫纖維綿羊血80～100ml；
蒸餾水加至1000ml。
上述培養(yǎng)基的制備方法為：稱取牛肝粉；麥芽浸粉；酵母浸出粉；氯化鈉；瓊脂；乳酸亞鐵；葡萄糖酸鋅鈣；毛子草酮；天冬酰胺混勻蒸餾水溶解，280℃，滅菌15min，冷卻到45℃，加入滅菌萘啶酮酸；無菌脫纖維綿羊血混勻，滅菌蒸餾水定容到1000ml后分裝。
優(yōu)化方案中，每1000ml培養(yǎng)基還含有酪蛋白磷酸肽0.1～0.5g。
優(yōu)化方案中，每1000ml培養(yǎng)基還含有維生素K1?0.01～0.1g。
優(yōu)化方案中，每1000ml培養(yǎng)基還含有濃度200g/L的生地黃水煮液?200～300ml。
上述優(yōu)化方案的培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
（1）取生地黃加水煮沸30-60min，過濾，取濾液，調(diào)整體積到濃度為200g/L，得生地黃水煮液；
（2）稱取牛肝粉；麥芽浸粉；酵母浸出粉；氯化鈉；瓊脂；乳酸亞鐵；葡萄糖酸鋅鈣；毛子草酮；天冬酰胺混勻溶于步驟（1）所得的生地黃提取液中混勻，280℃滅菌15min，冷卻到45℃，加入滅菌萘啶酮酸；滅菌維生素K1；滅菌絡(luò)蛋白磷酸肽；無菌脫纖維綿羊血混勻，滅菌蒸餾水定容到1000ml后分裝。
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