[發(fā)明專利]Hsa?miR?3200?5p在制備早期篩查或診斷Brachyury陽(yáng)性腫瘤試劑或試劑盒中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510266985.7
• 申請(qǐng)日: 2015-05-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104878012B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖建如;陳素;矯健;周振華;姜東杰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12Q1/68
• 代理公司: 上海元一成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)31268
• 代理人: 趙青

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，是microRNAs在制備早期篩查或診斷Brachyury陽(yáng)性腫瘤試劑或試劑盒中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

肺癌是目前全球死亡率最高的惡性腫瘤。美國(guó)每年大約有17萬(wàn)人死于肺癌，占整體癌癥死亡人數(shù)的30％。隨著經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展和空氣污染的日益加重，我國(guó)的肺癌發(fā)病率也呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)，已經(jīng)成為我國(guó)城市人口癌癥死亡的首要原因。據(jù)統(tǒng)計(jì)，肺癌患者的五年生存率僅為5-15％，其主要原因在于難于早期發(fā)現(xiàn)，大部分患者就診時(shí)已經(jīng)發(fā)生了不同程度的轉(zhuǎn)移。如死于肺癌的患者的尸檢中，有90％左右都會(huì)出現(xiàn)脊柱轉(zhuǎn)移病灶，肺癌的轉(zhuǎn)移成為患者生存期短預(yù)后差的重要原因，且轉(zhuǎn)移病灶的巨大疼痛也使得患者的生存質(zhì)量嚴(yán)重下降，加速了患者的死亡進(jìn)程。雖然國(guó)際上對(duì)于肺癌轉(zhuǎn)移的治療已由原先的消極對(duì)癥轉(zhuǎn)為以外科手術(shù)為主輔以化療、放療、靶向治療等多學(xué)科協(xié)作的綜合性模式，患者的生存期和生存質(zhì)量在一定程度上得到了提高，但由于缺乏簡(jiǎn)便有效的早期篩查方法以及對(duì)肺癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移機(jī)制認(rèn)知不足、治療方式的局限，肺癌仍然是造成患者死亡率居高不下的重要原因。目前國(guó)際上對(duì)于肺癌高危人群的篩查主要應(yīng)用低劑量CT掃描，但由于相對(duì)較高的成本和輻射制約了其在臨床上的廣泛應(yīng)用。基于以上原因，早期發(fā)現(xiàn)與腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移進(jìn)程相關(guān)的分子診斷標(biāo)記物便可以為腫瘤治療贏取一定的時(shí)間，成為控制腫瘤發(fā)展的重要途徑。為了達(dá)到這一目的，首先要找出相較于正常體細(xì)胞，在肺癌中發(fā)生特異性表達(dá)改變并與轉(zhuǎn)移等多種腫瘤發(fā)展進(jìn)程密切相關(guān)的腫瘤“靶點(diǎn)”，即找到與肝細(xì)胞中著名的甲胎蛋白(AFP)有相似點(diǎn)的腫瘤標(biāo)記物。

“腫瘤靶標(biāo)”這一概念早已被廣泛認(rèn)可并進(jìn)行了大量的研究，這一概念的核心是找到僅在腫瘤中特異性表達(dá)而在正常組織中不表達(dá)或局限性表達(dá)的分子，通過(guò)“生物導(dǎo)彈”直擊腫瘤，對(duì)正常組織造成最小化的破壞。這一概念的出現(xiàn)和隨之進(jìn)行的大量研究正逐漸使腫瘤獨(dú)有的特征具現(xiàn)化，并有可能最終“無(wú)所遁形”，也使得人類在與腫瘤的斗爭(zhēng)中掌握了一定的主動(dòng)權(quán)。對(duì)腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)和有效治療都有重大意義。

TATA-box轉(zhuǎn)錄因子Brachyury是T-box轉(zhuǎn)錄因子家族的成員之一，其同源體在諸多多細(xì)胞生物體內(nèi)表達(dá)，如秀麗線蟲、非洲爪蛙、老鼠、人類等胚胎中表達(dá)(參見(jiàn)文獻(xiàn)Papaioannou VE,Silver LM,et al.The T-box gene family.Bioessays 1998；20:9-19.Kispert A,Herrmann BG,et al.Homologs of the mouse Brachyury gene are involved in the specification of posterior terminal structures in Drosophila,Tribolium,and Locusta.Genes Dev 1994；8:2137-50.Herrmann BG,Labeit S,et al.Cloning of theTgene required in mesoderm formation in the mouse.Nature 1990；343:617-22)。T-box蛋白主要在中胚層的形成和分化中具有重要作用，在胚胎發(fā)育晚期則在大部分組織中關(guān)閉表達(dá)僅集中于脊索區(qū)表達(dá)，并在脊柱形成后隨著脊索的退化消失而在大多數(shù)正常成人組織中不表達(dá)，僅在睪丸中有表達(dá)、脾和小腸中有低水平表達(dá)的限制性表達(dá)方式(參見(jiàn)文獻(xiàn)Duane H.Hamilton,Ph.D.,Postdoctoral Fellow,et al.Cancer vaccines targeting the epithelial-mesenchymal transition:tissue distribution of Brachyury and other drivers of the mesenchymal-like phenotype of carcinomas.Semin Oncol.2012Jun；39(3):358-66.)。然而，在已知的人類多種腫瘤組織和細(xì)胞系中，Brachyury卻呈現(xiàn)出高水平的表達(dá)，這些腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞系是：小腸、胃、腎、膀胱、子宮、卵巢、睪丸、腦和淋巴組織，肺組織、結(jié)腸組織和前列腺組織來(lái)源的細(xì)胞系(參見(jiàn)文獻(xiàn)Palena C,Polev DE,et al.The human T-box mesodermal transcription factor Brachyury is a candidate target for T-cell-mediated cancer immunotherapy.Clin Cancer Res.2007 Apr 15；13(8):2471-8.Park JC,Chae YK,et al.Epigenetic silencing of human T(brachyury homologue)gene in non-small-cell lung cancer.Biochem Biophys Res Commun.2008 Jan 11；365(2):221-6.)。以上研究結(jié)果都提示了Brachyury可以應(yīng)用于多種來(lái)源的腫瘤診斷和治療中。然而，如何應(yīng)用腫瘤組織中高表達(dá)的Brachyury對(duì)人群進(jìn)行早期無(wú)創(chuàng)性的腫瘤篩查或進(jìn)行臨床診斷卻沒(méi)有具體有效的方法和研究。作為轉(zhuǎn)錄因子，Brachyury具有強(qiáng)大的啟動(dòng)或抑制下游基因轉(zhuǎn)錄的作用，因此，通過(guò)檢測(cè)其下游被調(diào)控的某些易檢測(cè)分子如外分泌蛋白質(zhì)或miRNA的表達(dá)量便可以作為Brachyury表達(dá)水平的指標(biāo)。