[發(fā)明專利]一種白接骨的組織培養(yǎng)快速繁殖方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510251937.0
• 申請(qǐng)日: 2015-05-18
• 公開（公告）號(hào): CN104813940B
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫駿威;朱誠;王飛娟;丁艷菲;江瓊;蔡沖
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國計(jì)量學(xué)院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務(wù)所有限公司33214
• 代理人: 林偉鑫

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物組培快速繁殖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及白接骨的組培快速繁殖方法。

背景技術(shù)

白接骨[Asystasiellaneesiana(Wall.) Lindau]為爵床科（Acanthaceae）白接骨屬多年生草本植物，分布于江蘇、浙江、安徽、江西、福建、廣東、廣西、湖南（芷江、大庸、永順、宜章）、湖北、云南、貴州、重慶、四川等地，生林下或溪邊。全草入藥，名白接骨、玉龍盤、無骨苧麻、玉梗半枝蓮、玉接骨、血見愁、玉錢草、麒麟草、玉連環(huán)、接骨草、猢猻節(jié)根、金不換、橡皮草、華可西達(dá)、小阿西達(dá)、蛀木蟲等。夏、秋季采收，曬干或鮮用。性涼，味苦、淡，入肺經(jīng)。具化瘀止血、續(xù)筋接骨、利尿消腫、清熱解毒之功效，主治吐血、便血、外傷出血、跌打瘀腫、扭傷骨折、風(fēng)濕肢腫、腹水、瘡瘍潰爛、癤腫、咽喉腫痛等癥。其花可僅觀賞用。在中國，該屬僅白接骨[Asystasiellaneesiana(Wall.) Lindau]一個(gè)種。白接骨的自然繁殖主要靠種子和根狀莖，其中每個(gè)果實(shí)僅含4粒種子，靠自然繁殖顯然不能達(dá)到大量繁殖的目的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種白接骨的組織培養(yǎng)快速繁殖方法。

為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明之目的，采用以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：一種白接骨的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟：

①叢生芽的誘導(dǎo)：3月取材的外植體在添加了6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.15 mg/L 的的MS基本培養(yǎng)基培養(yǎng)到芽長3 cm時(shí)取出，沿著莖切將兩側(cè)腋芽分開，然后轉(zhuǎn)移接種于第一MS基本培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)室光照培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為(25±1)℃，光照時(shí)間為14 h光/10 h暗，光照強(qiáng)度30.1-40 μmol/(m²·s)；

所述的第一MS基本培養(yǎng)基添加了：

6-BA 0.1-3.0 mg/L+NAA 0.1-1.0 mg/L、

6-BA 0.1-3.0 mg/L+IAA 0.1-3.0 mg/L、

6-BA 0.1-3.0 mg/L +TDZ 0.1-2.0 mg/L、

6-BA 0.1-3.0 mg/L +ZT 0.1-2.0 mg/L、

ZT 0.1-2.0 mg/L+NAA 0.1-1.0 mg/L、

ZT 0.1-2.0 mg/L+IAA 0.1-3.0 mg/L或

TDZ 0.1-2.0 mg/L+NAA 0.1-1.0 mg/L；

②不定芽的增殖生長：將上步誘導(dǎo)產(chǎn)生的叢生芽切成2-3個(gè)一組，轉(zhuǎn)接于第二MS基本培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)室光照培養(yǎng)；

所述的第二MS基本培養(yǎng)基添加了：

6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+NAA 0.1-1.0mg/L、

6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+IBA 0.1-1.0 mg/L或

6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+IAA0.1-3.0 mg/L；

③不定芽的生根培養(yǎng)：將上步增殖培養(yǎng)獲得的不定芽叢切成單個(gè)不定芽，轉(zhuǎn)接到添加了NAA 0.1-1.0 mg/L、IAA 0.1-3.0 mg/L或IBA 0.1-1.0 mg/L的1/4強(qiáng)度的MS基本培養(yǎng)基中；

④再生苗的煉苗和移栽：將上步完成生根培養(yǎng)的不定芽的培養(yǎng)瓶打開一條縫，讓其與外部空氣相通，6 h后半開瓶蓋，加入少量無菌水以保持培養(yǎng)基的濕潤，過1d后完全打開瓶蓋，讓它完全接受培養(yǎng)室的日光燈管的直接光照2d后將培養(yǎng)基搗碎，小心取出帶少量瓊脂的再生苗植株，在緩慢流水中用軟刷仔細(xì)清洗根部沾有的瓊脂塊，將清洗干凈的再生苗植株移栽至添加蛭石的消毒土中，在培養(yǎng)容器上罩以聚乙烯塑料薄膜以保持培養(yǎng)容器的濕度，培養(yǎng)容器置于陰涼地，5天即可揭開塑料蒲膜，于陰涼處培養(yǎng)7d后移至大田。

作為優(yōu)選方案：所述的第一MS基本培養(yǎng)基添加了6-BA 0-3.0 mg/L +ZT 0-2.0 mg/L。

作為優(yōu)選方案：所述的第二MS基本培養(yǎng)基添加了：6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L、6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+IAA 1.5 mg/L或6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+IBA 0.3 mg/L。