[發明專利]用于診治癌轉移的生物標志物及其用途

有效

• 申請號: 201510219193.4
• 申請日: 2015-05-01
• 公開（公告）號: CN104789683B
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 鄧濤;張治位;朱修篁
• 申請（專利權）人: 北京博奧醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;A61K48/00;A61P35/00;G01N33/574;C12N15/11
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本發明涉及用于診治癌轉移的生物標志物及其用途，更具體的涉及mir?1185?1和/或其成熟miRNA在診斷肺腺癌轉移中的新用途。發明通過對肺腺癌患者進行回顧性分析，將其分成兩組：肺腺癌轉移組和非轉移組，通過測序分析獲得miRNA表達數據，進而進行生物信息學分析，選取后備miRNA進行分子生物學驗證，結果顯示，本發明提供的miRNA和肺腺癌轉移密切相關，可用于臨床診斷及預防檢測，具有很好的實際應用價值。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體的涉及用于診治癌轉移的生物標志物及其用途，更具體的涉及mir-1185-1和/或其成熟miRNA在診治肺腺癌轉移中的新用途。

背景技術

在我國由于肺癌所致的死亡占全部腫瘤相關死亡的23％左右，大約90％的惡性腫瘤的死亡與腫瘤轉移有關，絕大多數肺癌患者由于腫瘤細胞的局部侵襲及遠處轉移，確診時己經失去手術機會。因此，深入了解參與肺癌侵襲及轉移的因子及可能的機制，對于肺癌的早期干預及個體化治療提供指導，以期能改善肺癌的預后。肺腺癌(lungadenocarcinoma)屬于非小細胞肺癌，易發生于女性及不抽煙者。在肺部的位置常較周邊，腫瘤擴大的速度較慢(倍增時間約120天)。早期無征兆，通常診斷出來時已經是晚期。非小細胞肺癌占肺癌總數的75％-80％。

miRNA通常由RNA聚合酶II(Pol II)轉錄生成。Pol II結合在以后形成發夾結構的頸環DNA序列附近。生成的轉錄本經修飾添加5’帽子結構和3’末端多腺苷酸尾巴結構，并剪切，生成的產物稱為初級miRNA(pri-miRNA)，該產物可能長達數千或數百核苷酸，可能包含多個miRNA環結構。

單個pri-miRNA可能含一到六個miRNA前體。這些發夾結構每個由約70nt左右的核苷酸組成。每個發卡結構附以部分序列以利于有效剪切處理。pri-miRNA中的雙鏈發夾RNA結構被叫做DGCR8的核蛋白(DiGeorge Syndrome Critical Region 8)辨認，DGCR8同Drosha酶一起形成微處理(microprocessor)復合體。在該復合體中，DGCR8組織Drosha蛋白的RNase III結構域使其在距離發卡結構約11個核苷酸處切割pri-miRNA，使其釋放發卡結構。釋放的發卡結構即為前miRNA(pre-miRNA),pre-miRNA在3’存在兩個懸空的核苷酸，pre-miRNA 5’為磷酸集團，3’為羥基集團。

在胞漿中，pre-miRNA發夾結構經RNase III Dicer切割處理。這種內源性核糖核酸酶(endoribonuclease)與發夾結構的3’相互作用并在環的3’和5’臂上完成切割，產生長約22nt并不完美匹配的miRNA：miRNA*雙鏈結構。

miRNA與靶mRNA的典型作用方式主要有兩種。在大多數情況下，復合物中的單鏈miRNA與靶mRNA的3’UTR不完全互補配對，阻斷靶基因的翻譯，從而調節基因表達。這種方式主要影響蛋白表達水平，并不影響mRNA的穩定性。近來，有研究對翻譯抑制理論提出質疑，發現被抑制的靶mRNAs和miRNAs共同聚集于胞漿中被稱為P小體(processing bodies，P-bodies)的區域，這個區域還濃縮了許多參與mRNA降解的酶類。P小體可能是作為未翻譯mRNA進行暫時的可逆儲存的容器，減少一些特定P小體組成蛋白的表達能夠緩和miRNA介導的基因表達抑制作用。P小體是胞漿中的一定區域，它包含參與多種轉錄后過程的蛋白質，例如：mRNA降解(mRNA degradation)、無義介導mRNA衰退(nonsense-mediated mRNAdecay,NMD)，轉錄抑制及RNA介導的基因沉默(RNA-mediated gene silencing)。