[發明專利]KRAS基因多點突變單管快速檢測方法及試劑盒在審
| 申請號： | 201510211543.2 | 申請日： | 2015-04-29 |
| 公開（公告）號： | CN104830981A | 公開（公告）日： | 2015-08-12 |
| 發明（設計）人： | 陳華云;陳嘉昌;劉淑園;肖湘文;丁渭;張天海;趙麗;方鳳銀;鄧利瓊 | 申請（專利權）人： | 廣州和實生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 510665 廣東省廣州市經濟*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | kras 基因 多點 突變 快速 檢測 方法 試劑盒 | ||
1.多點突變單管快速檢測方法，包括如下步驟：
a)設計針對不同點突變的ARMS引物及對應的下游引物、中介連接引物和通用熒光探針，其中，中介連接引物由與通用熒光探針部分序列互補的通用序列部分和與點突變下游的部分序列互補的特異部分組成；b)將ARMS引物及對應的下游引物、中介連接引物和通用熒光探針與快速Taq酶系統混合，擴增；c)檢測反應體系的熒光變化，確定是否存在點突變。
2.一種KRAS多點突變單管快速檢測試劑盒，包括DNA提取液，快速Taq酶系統和KRAS突變檢測引物，其特征在于：所述KRAS突變檢測引物由多組ARMS引物及對應的下游引物、中介連接引物，以及通用熒光探針組成，其中：
中介連接引物的一端序列與待KRAS突變位點下游的部分序列互補，另一端序列與通用熒光探針部分核酸互補配對。
3.根據權利要求2所述的KRAS多點突變單管快速檢測試劑盒，其特征在于：快速Taq酶系統的組成為dNTPS（U）、UNG酶、快速Taq酶。
4.根據權利要求2所述的KRAS多點突變單管快速檢測試劑盒，其特征在于：中介連接引物中與KRAS突變位點下游的部分序列互補的核酸數量不少于5?bp。
5.根據權利要求4所述的KRAS多點突變單管快速檢測試劑盒，其特征在于：中介連接引物中與KRAS突變位點下游的部分序列互補的核酸數量為15～30bp。
6.根據權利要求2所述的KRAS多點突變單管快速檢測試劑盒，其特征在于：中介連接引物中與通用熒光探針部分核酸互補配對的核酸數量不少于5?bp。
7.根據權利要求6所述的KRAS多點突變單管快速檢測試劑盒，其特征在于：中介連接引物中與通用熒光探針部分核酸互補配對的核酸數量為15～45bp。
8.根據權利要求2～7任意一項所述的KRAS多點突變單管快速檢測試劑盒，其特征在于：ARMS引物的序列如下：
。
9.根據權利要求8所述的KRAS多點突變單管快速檢測試劑盒，其特征在于：通用熒光探針的序列為：
5’-CT(dA-FAM)GAGCTCTACGTAGCCTTAGCAAGGCTGACTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’，對應的淬滅序列為：5’BHQ-GCTCTAG-3’。
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