[發(fā)明專利]一種評(píng)價(jià)水產(chǎn)品微生物動(dòng)態(tài)變化的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510192425.1
• 申請(qǐng)日: 2015-04-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104774952A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-07-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭清雄;艾春香
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建正源飼料有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 福州市鼓樓區(qū)博深專利代理事務(wù)所(普通合伙) 35214
• 代理人: 林志崢

1.一種評(píng)價(jià)水產(chǎn)品微生物動(dòng)態(tài)變化的方法，其特征在于，包括步驟：將水產(chǎn)品微生物菌落進(jìn)行454焦磷酸測(cè)序，所述454焦磷酸測(cè)序所需的emPCR產(chǎn)物的制備方法如下：

1)乳化油、擴(kuò)增混合液和試劑制備；所述的擴(kuò)增混合液包括下列各組分：emPCR?Additive，5×擴(kuò)增液，擴(kuò)增引物，emPCR酶混合液，PPiase，超純水；

2)水產(chǎn)品DNA文庫(kù)捕獲；

3)乳化；

4)擴(kuò)增；

5)磁珠回收；

6)DNA文庫(kù)磁珠富集；

7)測(cè)序引物退火，即制得454焦磷酸測(cè)序所用的emPCR產(chǎn)物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的評(píng)價(jià)水產(chǎn)品微生物動(dòng)態(tài)變化的方法，其特征在于，所述水產(chǎn)品為大黃魚。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的評(píng)價(jià)水產(chǎn)品微生物動(dòng)態(tài)變化的方法，其特征在于，所述的擴(kuò)增混合液包括下列各組分：350μL?emPCR?Additive，200μL?5×擴(kuò)增液，35μL擴(kuò)增引物，50μL?emPCR酶混合液，2μL?PPiase和290μL超純水。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的評(píng)價(jià)水產(chǎn)品微生物動(dòng)態(tài)變化的方法，其特征在于，所述454焦磷酸測(cè)序?yàn)榛诮沽姿嵩淼?54高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的評(píng)價(jià)水產(chǎn)品微生物動(dòng)態(tài)變化的方法，其特征在于，所述步驟4)的擴(kuò)增的反應(yīng)程序如下所示：

a、95℃，3min；

b、95℃，35s；

c、60℃，5.5min；

d、72℃，35s；

步驟b至d共50個(gè)循環(huán)；

e、10℃保存。