[發明專利]一種組合物及其應用

在審

• 申請號: 201510159337.1
• 申請日: 2015-04-03
• 公開（公告）號: CN104739862A
• 公開（公告）日: 2015-07-01
• 發明（設計）人: 王一飛;陳海佳;葛嘯虎;戴國勝;王小燕
• 申請（專利權）人: 廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司
• 主分類號: A61K35/35
• 分類號: A61K35/35;A61P17/00;A61K8/98;A61Q19/08;A61K35/16
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種組合物及其應用。

背景技術

隨著人們生活水平的提高，抗皺已成為越來越多人的需求。脂肪組織在抗皺方面的應用歷史悠久。脂肪組織被認為是一個具有儲存脂肪、內分泌、軟組織充填功能的器官，但在美容領域求美者經常會要求施行抽脂術去除多余脂肪。自從脂肪組織被認為是成人干細胞很有前景的來源之后，脂肪組織開始引起科研人員的關注，關于脂肪組織的研究也逐漸多了起來。脂肪組織主要由脂肪細胞、ASCs、血管內皮細胞、周細胞、成纖維細胞、巨噬細胞、和細胞外基質等組成，其中ASCs是近年來的研究熱點。

20世紀初，自體顆粒脂肪移植開始應用于臨床，由于其吸收率高、存活率低，且并發癥較多，限制了其在臨床中的應用。21世紀初，通過改進脂肪獲取技術，加速了脂肪血管化，提高了脂肪顆粒移植的成活率。但是壞死、吸收仍然是顆粒脂肪移植的主要并發癥。2003年，Kotaro等開始采用細胞輔助脂肪移植術(Cell-assisted?lipotransfer,CAL),將自體脂肪中新鮮分離的基質血管組分(Stromal?vascular?fraction,SVF)與移植脂肪混合，提高了移植脂肪中ASCs/脂肪細胞比例，取得了不錯的臨床效果，移植物存活率大約為40％到80％。

目前的抗皺用品應用時，修復效果有限，尤其是對較為明顯的皺紋，且維持抗皺效果的時間亦較短。因此，提供一種抗皺效果顯著、維持抗皺效果時效久的抗皺產品具有重要的現實意義。

發明內容

有鑒于此，本發明提供一種組合物及其應用。該組合物將SVF、PRP二者聯合起來，應用于皮膚抗皺，取得了更優的抗皺效果，抗皺效果維持的時間比兩者單獨應用的時間更長。從抗皺評分、抗皺時間來說，本發明提供的組合物與SVF、PRP兩者單獨使用均具有顯著差異(P＜0.05)。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種組合物，包括基質血管組分和富含血小板血漿。

在本發明的一些具體實施方案中，所述基質血管組分和富含血小板血漿的質量比為1:10～10:1。

在本發明的一些具體實施方案中，所述基質血管組分包括間充質干細胞、血管內皮細胞和血管平滑肌細胞。

在本發明的一些具體實施方案中，所述基質血管組分的制備方法為：獲得脂肪組織，預處理后酶解。

在本發明的一些具體實施方案中，所述酶解采用Ⅰ型膠原酶；所述Ⅰ型膠原酶的酶活為50～200IU/mg；所述酶解為20～40℃酶解10～60min。

在本發明的一些具體實施方案中，所述基質血管組分的制備方法包括如下步驟：

步驟1：獲得脂肪組織，與生理鹽水混合，400g離心10min；

步驟2：取步驟1獲得的離心后脂肪組織，破碎，與Ⅰ型膠原酶混合，于37℃，100R酶解30min；

步驟3：取步驟2酶解后的脂肪組織，800g離心10min；離心后收集沉淀；

步驟4：收集步驟3離心后的上清液，800g離心10min；離心后收集沉淀；與步驟3所得沉淀混合，用生理鹽水重懸，800g離心5min，收集沉淀；

步驟5：重復步驟4至少1次；

步驟6：取步驟5獲得的沉淀與紅細胞裂解液(Miltenyi?Biotec)混合，裂解15min，800g離心5min，收集沉淀；

步驟7：取步驟6獲得的沉淀用生理鹽水重懸，過濾，800g離心5min，用生理鹽水重懸。

在本發明的一些具體實施方案中，所述基質血管組分中間充質干細胞表面抗原表達率為31.9％，血管內皮細胞表面抗原表達率為2.2％，血管平滑肌細胞表面抗原表達率為1.5％。

在本發明的一些具體實施方案中，所述Ⅰ型膠原酶與破碎后的脂肪組織的體積比為1:1，所述Ⅰ型膠原酶的濃度為0.01％～10％，優選Ⅰ型膠原酶的濃度為0.125％。

在本發明的一些具體實施方案中，所述紅細胞裂解液與上述步驟5獲得的沉淀的體積比為1:1，所述紅細胞裂解液的濃度為0.125％。

在本發明的一些具體實施方案中，所述富含血小板血漿的制備方法為：獲得臍帶血，離心，獲得富含血小板血漿。

在本發明的一些具體實施方案中，所述富含血小板血漿的制備方法為：獲得臍帶血，與枸櫞酸鈉抗凝劑混合，300g離心10min，收集血漿，1500g離心10min；收集離心管底部的血漿和血小板，重懸。