[發(fā)明專(zhuān)利]一種鑒別結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌種的引物及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510098086.0
• 申請(qǐng)日: 2015-03-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104651520B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫照剛;黃海榮;苗慧芳;朱寶利;陳素婷;劉飛;徐玉輝
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院;中國(guó)科學(xué)院微生物研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/32
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11245
• 代理人: 關(guān)暢,白艷

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域，具體涉及一種鑒別結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌種的引物及應(yīng)用。

背景技術(shù)

結(jié)核病是最嚴(yán)重的流行性傳染疾病之一，使人類(lèi)的公共健康面臨著巨大的挑戰(zhàn)，它在全世界范圍內(nèi)有著相當(dāng)高的致病率和致死率。結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(MTBC)中的一些菌種是引發(fā)人類(lèi)和動(dòng)物結(jié)核病的病原菌。引起人類(lèi)結(jié)核病的主要病原菌即結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)起源于大約3百萬(wàn)年前，并因耐藥株的出現(xiàn)持續(xù)影響著人類(lèi)健康。除了結(jié)核分枝桿菌，在病人體內(nèi)還發(fā)現(xiàn)了MTBC中的其它菌種，包括牛型分枝桿菌(M.bovis)、肯尼迪分枝桿菌(M.canetii)、非洲分枝桿菌(M.africanum?subtype?I)、山羊分枝桿菌(M.caprae)、田鼠分枝桿菌(M.microti)。其中牛型分枝桿菌是牛結(jié)核病的主要病原菌，由于直接與牛接觸或食用未消毒的奶制品致使人類(lèi)的感染。肯尼迪分枝桿菌、非洲分枝桿菌、山羊分枝桿菌、田鼠分枝桿菌均常見(jiàn)于非洲病人體內(nèi)。

傳統(tǒng)的鑒定MTBC菌種的方法是根據(jù)菌落形態(tài)、氧偏好性、煙酸累積、硝酸鹽還原酶的活性以及生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)等的表型特征來(lái)判斷，這些方法都制約于緩慢的細(xì)菌培養(yǎng)，而且涉及主觀解讀易于判錯(cuò)。傳統(tǒng)的鑒定方法由于時(shí)間長(zhǎng)等原因已不能滿(mǎn)足當(dāng)前的臨床需要，因此快速鑒定MTBC中的成員，對(duì)于控制傳染源和早期治療起著至關(guān)重要的作用，也可為臨床治療提供用藥指導(dǎo)。

現(xiàn)今的分子鑒別方法主要有IS6110-RFLP，MIRU-VNTR、Spoligotyping和SNP。IS6110-RFLP應(yīng)用廣泛，分辨率較高，但該方法基于大量菌株的培養(yǎng)，價(jià)格高，時(shí)間長(zhǎng)且IS6110拷貝數(shù)較少的菌株不易分型；MIRU-VNTR不需要大量培養(yǎng)菌株，結(jié)果容易讀識(shí)，但由于位點(diǎn)組合不同，其分辨率和成簇率亦不盡相同；Spoligotyping分型方法用時(shí)較短，成本較低，但分辨率較低，圖片結(jié)果易產(chǎn)生假陽(yáng)性；SNP需要測(cè)序，價(jià)格昂貴，不能在實(shí)驗(yàn)室間推廣。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種鑒別結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌種的成套引物。

本發(fā)明提供的鑒別結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌種的成套引物，由引物對(duì)(1)-(7)組成：

(1)為由SEQ?ID?No.1所示的單鏈DNA和SEQ?ID?No.2所示的單鏈DNA組成的引物對(duì)1；

(2)為由SEQ?ID?No.3所示的單鏈DNA和SEQ?ID?No.4所示的單鏈DNA組成的引物對(duì)2；

(3)為由SEQ?ID?No.5所示的單鏈DNA和SEQ?ID?No.6所示的單鏈DNA組成的引物對(duì)3；

(4)為由SEQ?ID?No.7所示的單鏈DNA和SEQ?ID?No.8所示的單鏈DNA組成的引物對(duì)4；

(5)為由SEQ?ID?No.9所示所示的單鏈DNA和SEQ?ID?No.10所示的單鏈DNA組成的引物對(duì)5；

(6)為由SEQ?ID?No.11所示的單鏈DNA和SEQ?ID?No.12所示的單鏈DNA組成的引物對(duì)6；

(7)為由SEQ?ID?No.13所示的單鏈DNA和SEQ?ID?No.14所示的單鏈DNA組成的引物對(duì)7。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種鑒別結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌種的PCR試劑組。

本發(fā)明提供的鑒別結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌種的PCR試劑組由PCR試劑1、PCR試劑2、PCR試劑3、PCR試劑4、PCR試劑5、PCR試劑6和PCR試劑7組成。

上述PCR試劑組中，所述PCR試劑1包括上述成套引物中的引物對(duì)1；所述PCR試劑2包括上述成套引物中的引物對(duì)2；所述PCR試劑3包括上述成套引物中的引物對(duì)3；所述PCR試劑4包括上述成套引物中的引物對(duì)4；所述PCR試劑5包括上述成套引物中的引物對(duì)5；所述PCR試劑6包括上述成套引物中的引物對(duì)6；所述PCR試劑7包括上述成套引物中的引物對(duì)7。

上述PCR試劑組中，所述引物對(duì)1、引物對(duì)2、引物對(duì)3、引物對(duì)4、引物對(duì)5、引物對(duì)6或引物對(duì)7中的各條引物的物質(zhì)的量相同。

上述成套引物中各個(gè)引物對(duì)獨(dú)立包裝，各條引物獨(dú)立包裝。

本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種用于鑒別結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌種的試劑盒。

本發(fā)明提供的用于鑒別結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌種的試劑盒，其含有上述的成套引物或含有上述的PCR試劑組。