[發明專利]一種復合光合菌肥的制備方法

在審

• 申請號: 201510095217.X
• 申請日: 2015-03-04
• 公開（公告）號: CN104671853A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發明（設計）人: 胡艷暉
• 申請（專利權）人: 胡艷暉
• 主分類號: C05F11/08
• 分類號: C05F11/08;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

1.一種復合光合菌肥的制備方法，其特征在于：采用著色菌科中的沙氏外硫紅螺菌菌種與紅螺菌科中的纖細紅螺菌按以下步驟進行培養：

沙氏外硫紅螺菌半固體種子活化培養：將沙氏外硫紅螺菌種穿刺在半固體沙氏外硫紅螺菌培養基中，25-30℃光照培養7-10天，待穿刺的菌線變紅并長出菌苔，即可為活化的沙氏外硫紅螺菌種；

纖細紅螺菌平板活化：將纖細紅螺菌菌種在平板上劃線活化，溫度25-35℃活化培養3-5天，挑取大個菌落作為活化種子；

沙氏外硫紅螺菌種子培養：將活化的菌種接種至沙氏外硫紅螺菌種子液體培養基中，溫度25-35℃，光照強度為：1000-3000lux，光照厭氧培養7-10天，檢測種子的OD660≥1.2，活菌數≥6億cfu/ml即為種子培養液；

纖細紅螺菌種子培養：將挑取大個纖細紅螺菌菌落作為活化種子接種到纖細紅螺菌種子培養基中，溫度25-35℃，光照強度為：1000-3000lux，光照靜置培養3-5天，檢測種子的OD660≥0.8，活菌數≥4億cfu/ml即為種子培養液；

發酵培養：將沙氏外硫紅螺菌種子培養液與發酵培養基以1：3-1：5的接種量接種，同時將纖細紅螺菌種子培養液與發酵培養基按1：6-1：10的接種量接入，在光照培養罐中厭氧培養，培養溫度25-35℃，光照強度為：1000-4000lux，攪拌速度為120轉/分鐘，待培養至第三天，開始流加300?g/L的硫代硫酸鈉溶液至發酵培養基硫代硫酸鈉的濃度至1-3?g/L，繼續培養3-5天，待檢測其OD660≥6，活菌數≥50億cfu/ml，其中沙氏外硫紅螺菌不低于25億cfu/ml，纖細紅螺菌不低于20億cfu/ml，即可放罐，灌裝，包裝成品。

2.根據權利要求1所述的復合光合菌肥的制備方法，其特征在于所述的半固體沙氏外硫紅螺菌培養基為：氯化銨0.4-1.2g/L，磷酸二氫鉀0.5-1g/L，二水氯化鈣0.05-0.2g/L，氯化鎂0.1-0.5g/L，蘋果酸鈉2-10?g/L,醋酸鈉1-3g/L，九水硫化鈉0.1-1g/L，瓊脂8-10g/L，氯化鈉0.5-4g/L,?121℃滅菌15分鐘，用醋酸調PH至7.0-7.2,其中九水硫化鈉先配制成0.1g/mL單獨滅菌。

3.根據權利要求1所述的復合光合菌肥的制備方法，其特征在于所述的沙氏外硫紅螺菌種子液體培養基為：氯化銨0.4-1.2g/L，磷酸二氫鉀0.5-1g/L，二水氯化鈣0.05-0.2g/L，氯化鎂0.1-0.5g/L，蘋果酸鈉2-10?g/L,?醋酸鈉1-3g/L，九水硫化鈉0.1-1g/L，氯化鈉0.5-4g/L,121℃滅菌15分鐘，用醋酸調PH至7.0-7.2,其中九水硫化鈉先配制成0.1g/mL單獨滅菌。

4.根據權利要求1所述的復合光合菌肥的制備方法，其特征在于所述的纖細紅螺菌種子液體培養基為:?氯化銨0.8-1.2g/L，磷酸二氫鉀0.5-1g/L，二水氯化鈣0.05-0.2g/L，氯化鎂0.1-0.5g/L，蘋果酸鈉2-10?g/L,醋酸鈉1-3g/L，氯化鈉1-2g/L,酵母膏0.2-1g/L?,121℃滅菌15分鐘，用滅菌醋酸調PH至7.0-7.2。

5.根據權利要求1所述的復合光合菌肥的制備方法，其特征在于所述的纖細紅螺菌平板固體培養基為種子液體培養基加入20?g/L的瓊脂形成的。

6.根據權利要求1所述的復合光合菌肥的制備方法，其特征在于所述的發酵培養基：氯化銨1.2g/L，磷酸二氫鉀0.8g/L，二水氯化鈣0.1g/L，氯化鎂0.3g/L，蘋果酸鈉4g/L，醋酸鈉8g/L，酵母膏0.4g/L?,?氯化鈉1g/L,121℃滅菌15分鐘，用蘋果酸調PH至6.8-7.0。