[發明專利]一種石油降解菌P?6及其應用

有效

• 申請號: 201510093326.8
• 申請日: 2015-03-02
• 公開（公告）號: CN104651280B
• 公開（公告）日: 2017-09-26
• 發明（設計）人: 徐紅霞;吳吉春;施小清;孫媛媛
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C02F3/34;B09C1/10;C12R1/01;C02F103/06
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙)32204
• 代理人: 肖明芳

技術領域

本發明具體涉及一種石油降解菌P-6及其應用。

背景技術

在原油的開采、運輸、儲存、煉制和使用過程中，大量原油及其衍生產品不可避免地進入環境，對河流、土壤、地下水以及海洋等環境造成嚴重污染。在陸地，原油污染一般由輸油管道破裂、儲油罐滲漏等造成；在海洋中，沿海工業尤其是煉油廠的排放以及各類溢油事故是原油污染的重要來源。據不完全統計，全世界平均每年有600-1000萬噸原油通過各種途徑進入環境(王連生，1994)，之后通過機械作用、物理化學作用和生物作用等擴散至污染點以外的更大范圍。原油的化學組成復雜，包括烷烴、環烷烴、芳香烴等多種有毒物質，其中一些化合物如多環芳烴具有潛在或被證實的致癌變、致突變和致畸變作用，并能通過食物鏈在動植物及人體內富集，對生態環境和人類健康造成巨大威脅。

近年來，采用生物修復技術去除環境中的原油污染物已成為國內外學者的熱點之一，該技術具有經濟高效、環境友好，不產生二次污染的特點，較之傳統的物理、化學修復法具有明顯優勢。生物修復技術的關鍵是篩選出能夠高效降解目標污染物的微生物。原油中包含了以稠環芳香烴為代表的多種難降解有機物，生物可利用性低，已有降解微生物對原油的降解能力存在很大差異。信艷娟等分離出一株原油降解菌Nitratireductor basaltis，14d內對原油(初始濃度為1g/L)的平均降解率為63.5％。(信艷娟，劉亞男，吳佩春，曹旭鵬，薛松，一株原油降解菌的分離鑒定及降解特性研究，微生物學通報，2013，40(4)：558-566.)袁紅莉等篩選出的原油降解菌Corynebacterium ptr13，對原油(0.05g/L)的7d降解率為41％。(袁紅莉，楊金水，王占生，李寶珍，仉磊，林壬子，降解石油微生物菌種的篩選及降解特性，中國環境科學，2003，23(2)：157-161.)馮晉陽和吳小寧從長期被石油污染土壤中馴化得到的Microbacterium菌屬原油降解菌SY1，雖然SY1對原油的5d降解率為66.1％，但是降解體系中原油的初始濃度僅為0.5g/L。(馮晉陽，吳小寧，高效原油降解菌的篩選及其在生物活性炭中的應用，環境污染與防治，2011，33(6)：39-43.)因此，有必要進一步篩選高效原油降解菌，研究其降解特性，為原油污染環境的生物治理提供菌株和基因材料。

發明內容

發明目的：本發明的目的在于提供一種石油降解菌P-6，該菌已于2014年10月31日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.9913。

本發明的另一個目的在于提供上述石油降解菌P-6的應用。

為實現上述技術目的，本發明采取的技術方案如下：

一種石油降解菌P-6，其分類命名為微桿菌Microbacterium sp.P-6，已于2014年10月31日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，登記入冊編號為CGMCC No.9913。所述石油降解菌P-6以沙特原油為唯一碳源和能源篩選得到，菌株P-6呈桿狀，革蘭氏染色結果呈陰性。菌株P-6能夠在溫度15-35℃，pH 5-9的范圍內以原油為唯一碳源進行生長繁殖。菌株P-6在NCBI的GenBank數據庫中的序列登錄號為HM107776。該細菌與微桿細菌聚在一群，其中，P-6與Microbacterium sp.Sq(NCBI登錄號EU293209)同源性最高，達100％。用MEGA4.1計算出序列的系統進化距離，采用鄰位相連法構建系統進化樹，將菌株P-6鑒定為Microbacterium sp.P-6。

本菌株于2009年9月篩選得到，篩選方法如下：

原油污染土樣：某加油站儲油管道長期滴漏部分下方地表以下0.5m～1m處的被污染土壤。

原油：來自中石化加油站提供的沙特原油。

富集培養基：牛肉膏0.5％、蛋白胨1.0％、NaCl0.5％，pH7.0～7.2。配制固體培養基時添加2.0％的瓊脂。