[發明專利]一種同時檢測藍狐、貉和犬物種成分的引物組及其應用

有效

• 申請號: 201510092831.0
• 申請日: 2015-03-02
• 公開（公告）號: CN104611454B
• 公開（公告）日: 2016-11-02
• 發明（設計）人: 孫偉麗;李光玉;鐘偉;王卓;楊雅涵
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院特產研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 張勇

技術領域

本發明涉及一種同時檢測藍狐、貉和犬物種成分的引物組及其應用，屬于動物源成分特異性檢測技術領域。

背景技術

藍狐也稱北極狐，是屬于犬科、北極狐屬的毛皮動物，在我國作為特種養殖動物已有幾十年的歷史。藍狐皮張性能優良，深受裘皮市場的青睞。近年來，藍狐的毛皮制品市場需求量很大，養殖數量也不斷擴大。貉屬于犬科貉屬動物，皮張作為主要的產品，冬季取皮后，藍狐肉和貉肉經常被應用到動物飼料甚至是食品中。目前我國畜牧業行業中針對于毛皮動物肉的檢驗檢疫相關管理規定仍處于空白階段，對于毛皮動物肉營養價值的研究很少，并且人們對于食用毛皮動物肉存在認識上的誤區，有些地區受到風俗習慣的影響，從心理上很難接受毛皮動物肉制品。

近年來，羊肉卷市場比較混亂，很多壓制的羊肉卷中摻雜著水貂肉、狐貍肉、貉子肉以及其他肉類，從感官上難以去分辨，也曾有調查發現，因為貉和犬都屬于犬科動物，貉肉有被冒充為狗肉的現象，為了能快速、特異性檢測出肉制品或者飼料中的貉的成分，有必要開發出一種基于分子水平貉源性成分的檢測方法，為檢驗檢疫部門或者消費者提供便利的技術服務，并且要求方法簡便易于操作，檢測成本低廉。

目前，國外已對牛、綿羊、豬、雞的源性成分進行了研究報道，國內對牛、綿羊、豬、雞、驢、馬、鹿屬、獅、虎、豹等源性成分鑒定進行了研究報道。但是，在用分子生物學方法鑒定檢測動物源性成分的研究上，對藍狐、貉源性成分鑒別檢測的研究很少，尤其是缺乏能夠同時、有效檢測和區分犬科動物成分的方法。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供了一種同時檢測藍狐、貉和犬物種成分的引物組，采取的技術方案如下：

本發明的目的在于提供一種同時檢測藍狐、貉和犬物種成分的引物組，該引物組種藍狐物種成分引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1-SEQ?ID?NO.2所示；所述貉物種成分引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3-SEQ?ID?NO.4所示；所述犬物種成分引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5-SEQ?ID?NO.6所示。

所述藍狐物種擴增產物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.7所示；所述貉物種成分擴增產物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.8所示；所述犬物種成分擴增產物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9所示。

所述引物組用于肉制品、飼料和毛皮產品中藍狐、貉和犬物種成分的檢測。

本發明的另一目的在于提供一種利用所述引物組同時檢測藍狐、貉和犬物種成分的方法，該方法是通過提取待測樣品DNA，以SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示藍狐特異性引物對序列、SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4所示貉特異性引物對序列、SEQ?ID?NO.5和SEQ?ID?NO.6所示犬特異性引物對序列為引物，進行PCR擴增，最后對擴增產物進行電泳檢測和/或序列分析。

優選地，所述待測樣品DNA為線粒體基因組DNA。

所述方法中所述藍狐特異性引物，擴增目標的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.7所示；所述貉特異性引物，擴增目標的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.8所示；所述犬特異性引物，擴增目標的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9所示。

所述PCR擴增，反應體系為50μL：DNA模板3μL；上游引物和下游引物各1.0μL；rtaq?mix?2x酶25μL，純水25μL；PCR反應程序為：預變性：94℃，3min；進入循環：94℃變性60s，58℃退火60s，72℃延伸60s，35次循環；終止延伸：72℃，7min；4℃保存反應產物。

所述方法應用于肉制品、飼料和毛皮產品中藍狐、貉和犬物種成分的檢測。

本發明的另一目的在于提供一種含有所述引物組的試劑盒，該試劑盒包括10×PCR緩沖液、10umol/L藍狐物種成分正向引物、10umol/L藍狐物種成分反向引物、10umol/L貉物種成分正向引物、10umol/L貉物種成分反向引物、10umol/L犬物種成分正向引物、10umol/L犬物種成分反向引物、10umol/L?dNTP和5U/uLTaqDNA聚合酶；其中，藍狐物種成分引物的正向引物如SEQ?ID?NO.1所示，藍狐物種成分引物的反向引物如SEQ?ID?NO.2所示，貉物種成分引物的正向引物如SEQ?ID?NO.3所示，貉物種成分引物的反向引物如SEQ?ID?NO.4所示，犬物種成分引物的正向引物如SEQ?ID?NO.5所示，犬物種成分引物的反向引物如SEQ?ID?NO.6所示。