[發明專利]一種假交替單胞菌發酵生產卡拉膠酶的培養基及發酵方法

在審

• 申請號: 201510084198.0
• 申請日: 2015-02-16
• 公開（公告）號: CN104611315A
• 公開（公告）日: 2015-05-13
• 發明（設計）人: 肖安風;蔡慧農;倪輝;許彩云;朱艷冰;楊秋明;陳艷紅;姜澤東;杜希萍;楊遠帆;黃高凌;李利君
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及發酵的技術領域，尤其涉及一種食鹿角菜假交替單胞菌發酵生產卡拉膠酶的培養基及其發酵方法。

背景技術

卡拉膠是從一些紅藻的細胞壁中提取到的天然海藻多糖，在生化、臨床、醫藥、食品、化工等領域應用廣泛。卡拉寡糖是由卡拉膠降解形成，具有抗氧化、抗病毒、抗腫瘤、免疫調節和促進植物生長等多種新型生理活性，相比卡拉膠具有更廣泛的應用價值。

目前，卡拉寡糖一般通過傳統的化學和物理降解的方法獲得，但是傳統方法制備卡拉寡糖存在著反應條件難控制、降解產物不均一、損耗多、污染環境等問題，而酶法具有高效、特異、反應條件溫和、降解過程易于控制、反應產物易分離、環境污染少等優點。因此，卡拉膠酶酶解卡拉膠將逐漸取代傳統的物理、化學等降解方法成為制備卡拉膠寡糖的最佳方法。

我國擁有遼闊的海域，海洋中豐富的海藻資源為生產研究提供了充足海藻多糖。由于卡拉膠酶的主要來源是海洋微生物，海洋環境的特殊性導致了卡拉膠酶的穩定性不好或者活力不高，限制了其在生產中的應用。有鑒于此，本發明人研究和設計了一種食鹿角菜假交替單胞菌發酵生產卡拉膠酶的培養基及其發酵方法，本案由此產生。

發明內容

本發明的目的在于提供一種食鹿角菜假交替單胞菌發酵生產卡拉膠酶的培養基，利用一株能降解卡拉膠的食鹿角菜假交替單胞菌（Pseudoalteromonas?sp.）ASY5（該菌種來源于中國工業微生物菌種保藏管理中心(CICC)，保藏編號：CICC?23819），采用本發明的培養基后，可以有效提高食鹿角菜假交替單胞菌發酵生產卡拉膠酶的單位產量。

本發明的另一目的在于提供利用上述培養基進行食鹿角菜假交替單胞菌發酵卡拉膠酶的方法，通過種子活化、搖瓶發酵、罐上發酵及中試放大發酵的逐級放大培養步驟，確定最佳的發酵條件，進而提高最終發酵液中卡拉膠酶的單位產量。

為實現上述目的，本發明解決其技術問題的技術方案是：

一種所述食鹿角菜假交替單胞菌ASY5發酵生產卡拉膠酶的培養基，包括菌種活化培養基、種子培養基、發酵培養基；

所述菌種活化培養基為：牛肉膏?10?g/L，胰蛋白胨?10?g/L?，瓊脂?20?g/L，NaCl?21.1?g/L?，KCl?0.58?g/L?，CaCl₂?0.811?g/L?，MgCl₂·6H₂O?3.6?g/L?，NaHCO₃?0.083?g/L?，MgSO₄·7H₂O?2.625?g/L?，調pH到7.3，121℃滅菌20?min；

所述種子培養基為：牛肉膏?10?g/L，胰蛋白胨?10?g/L?，NaCl?21.1?g/L?，KCl?0.58?g/L?，CaCl₂?0.811?g/L?，MgCl₂·6H₂O?3.6?g/L?，NaHCO₃?0.083?g/L?，MgSO₄·7H₂O?2.625?g/L?，調pH到7.3，121℃滅菌20?min；

所述發酵培養基為：卡拉膠?2.5?g/L?，胰蛋白胨?3.0?g/L?，NaCl?30.0?g/L?，KCl?0.1?g/L?，MgSO₄·7H₂O?3.0?g/L?，FeSO₄·7H₂O?0.0366?g/L?，Na₂HPO₄·12H₂O?3.78?g/L?，NaH₂PO₄·2H₂O1.3?g/L?，CaCl₂?0.2?g/L?，121℃滅菌20?min。

本發明還涉及所述食鹿角菜假交替單胞菌ASY5利用如上所述培養基生產卡拉膠酶的發酵方法，包括以下步驟：

種子的活化與制備：將上述食鹿角菜假交替單胞菌ASY5菌種接至菌種活化培養基中，20℃培養24?h，再接至裝有種子培養基的搖瓶中，20℃培養24?h，獲得搖瓶種子液；

搖瓶發酵：搖瓶種子液接種至裝有適用于食鹿角菜假交替單胞菌ASY5產卡拉膠酶發酵培養基的搖瓶之中，20℃培養72?h，獲得含有卡拉膠酶的發酵液；