[發(fā)明專利]一種用于修復(fù)硝基甲苯污染土壤的微生物制劑的制備工藝

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510083996.1
• 申請(qǐng)日: 2015-02-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104694427B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔洹滔;李慧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島楷博晶瑞生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;B09C1/10;C12R1/085;C12R1/265;C12R1/01
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于修復(fù)硝基甲苯污染土壤的微生物制劑的制備工藝。

背景技術(shù)

TNT(2，4，6三硝基甲苯)是一種無(wú)色或淡黃色晶體，溶點(diǎn)為354K(80.9℃)。TNT是目前產(chǎn)量最高的生產(chǎn)炸藥，近年來(lái)彈藥車間中TNT的制造、加工和包裝已經(jīng)導(dǎo)致土壤高濃縮的污染，最終將導(dǎo)致地下水的污染。人長(zhǎng)期暴露于硝基甲苯會(huì)增加患貧血癥和肝功能不正常的機(jī)會(huì)。注射了或吸入三硝基甲苯的動(dòng)物亦發(fā)現(xiàn)會(huì)影響血液和肝臟、脾臟發(fā)大和其他有關(guān)免疫系統(tǒng)的壞影響。亦有證據(jù)證明了TNT對(duì)男性的生殖功能有不良影響，而TNT也被列為一種可能致癌物。目前，該類污染物處理難度較大。

現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)硝基甲苯污染處理的方式主要有：物理方法：吸附法和萃取法；化學(xué)法：濃縮焚燒法、紫外照射法、臭氧及組合臭氧氧化法等；然而，物理方法、化學(xué)方法處理三硝基甲苯廢水，操作復(fù)雜，費(fèi)用貴，治理不徹底，效果令人不堪滿意。生物法是利用生物的新陳代謝作用對(duì)廢水中的污染物進(jìn)行轉(zhuǎn)化，使之無(wú)害化的處理方式。硝基甲苯類化合物降解菌對(duì)硝基甲苯的徹底降解是十分必需的。許多化工廠已經(jīng)應(yīng)用降解性微生物處理硝基甲苯，并且已經(jīng)取得了顯著的效果。中國(guó)專利CN102864108A公開(kāi)了一種修復(fù)硝基甲苯污染土壤的復(fù)合菌劑，該菌劑具備一定的修復(fù)功能，但是部分菌株的繁殖速率慢，以及對(duì)二硝基甲苯的處理效果差，不能兼做肥料。因此，我們需要開(kāi)發(fā)研制一種用于去除土壤中硝基甲苯的新型微生物制劑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明需要解決的技術(shù)問(wèn)題是，克服了現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足之處，提供了一種用于修復(fù)硝基甲苯污染土壤的微生物制劑的制備工藝，該工藝簡(jiǎn)單可行，其制備的微生物制劑包含多種菌株，配伍合理，協(xié)同作用強(qiáng)，能夠有效地去除土壤中的硝基甲苯，而且還可以作為一種生物菌肥，大大提高了糧食產(chǎn)量；本發(fā)明工藝制備的微生物制劑投入成本低廉，可大規(guī)模推廣使用。

本發(fā)明的目的是通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種用于修復(fù)硝基甲苯污染土壤的微生物制劑的制備工藝，其包括如下步驟：將復(fù)合菌液和生物有機(jī)質(zhì)混合攪拌均勻，30℃培養(yǎng)12小時(shí)，然后添加輔料和天然礦物質(zhì)，100轉(zhuǎn)/min攪拌3min，最后進(jìn)行低溫干燥，干燥溫度為20℃，干燥后含水量為8％，即得；所述復(fù)合菌液、輔料、天然礦物質(zhì)以及生物有機(jī)質(zhì)的質(zhì)量比為：1-2∶1-2∶3-4∶10-15。

所述復(fù)合菌液按照如下方法制備而成：將鮑曼不動(dòng)桿菌、蠟狀芽孢桿菌、赤紅球菌、藤黃微球菌以及糞腸球菌分別培養(yǎng)成濃度為1×10⁸個(gè)/m1的菌液，按照1∶1∶2∶3∶3的體積比混合攪拌均勻即得。

所述輔料按照如下方法制備而成：

首先控制鋸末和殼聚糖的粒徑均為50-100目，然后將鋸末、殼聚糖和甘油按照1∶1∶1的質(zhì)量比混合均勻，即得。

所述天然礦物質(zhì)按照如下方法制備而成：

首先將沸石進(jìn)行粉碎處理，得到粒徑在50-100目之間的沸石粉，然后與腐植酸和草炭按照1∶1∶1的重量比混合均勻，即得；所述腐植酸和草炭的粒徑均控制在50-100目之間；

所述生物有機(jī)質(zhì)按照如下方法制備而成：將豆粕按1∶1的重量比加水，攪拌均勻，90℃提取1h，過(guò)濾，取上清液即為豆粕浸提液；將花生殼曬干，用粉碎機(jī)粉碎成花生殼粉；將花生殼粉和豆粕浸提液添加到攪拌罐中，500轉(zhuǎn)/分鐘的速度攪拌15分鐘后，將攪拌罐中的物料送入反應(yīng)器中，往反應(yīng)器中通入水蒸汽，維持反應(yīng)器的溫度在95℃以上，保溫反應(yīng)30分鐘，最后自然冷卻即得；花生殼粉和豆粕浸提液質(zhì)量比為1∶2。

所述鮑曼不動(dòng)桿菌為鮑曼不動(dòng)桿菌(Acinetobacter baumanii)為ATCC 19606；所述蠟狀芽孢桿菌為蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)ATCC 10876；所述赤紅球菌為赤紅球菌(Rhodococcus ruber)ATCC 15906；所述藤黃微球菌為藤黃微球菌(Micrococcus luteus)ATCC 49442；所述糞腸球菌為糞腸球菌(Enterococcus faecalis)為ATCC 29212。

上述微生物制劑的使用方法包括：首先將土壤翻松平整，翻土深度為30-40cm，噴灑水，保持土壤含水量為30％，然后按照每立方米土壤使用200g微生物制劑的添加量播撒微生物制劑。

本發(fā)明所述菌種均可以從美國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù)(ATCC)等商業(yè)渠道購(gòu)買得到。本發(fā)明的菌株的擴(kuò)大培養(yǎng)方法可按照文獻(xiàn)記載或者現(xiàn)有技術(shù)的記載進(jìn)行，此處不是本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)，限于篇幅，并不一一贅述。