[發(fā)明專利]片段縮合制備利拉魯肽的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201510079168.0 | 申請(qǐng)日： | 2015-02-15 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN104650219B | 公開(kāi)（公告）日： | 2017-11-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 彭雅麗;王銳;常民;薛宏祥;魏麗娟;王曉麗 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 蘭州大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C07K14/605 | 分類號(hào)： | C07K14/605;C07K1/10;C07K1/06;C07K1/04 |
| 代理公司： | 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙)32204 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 730000 *** | 國(guó)省代碼： | 甘肅;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 片段 縮合 制備 利拉魯肽 方法 | ||
1.片段縮合制備利拉魯肽的方法，其特征在于，固相合成4個(gè)側(cè)鏈保護(hù)的肽片段序列，將各肽片段在溶液體系中逐步偶聯(lián)得到全保護(hù)利拉魯肽直鏈多肽，脫去第20位Lys的側(cè)鏈保護(hù)，并完成修飾，形成全保護(hù)利拉魯肽，然后裂解脫除保護(hù)基得到利拉魯肽粗肽，純化換鹽得到利拉魯肽；
其中，所述的4個(gè)肽片段序列為：
第一肽片段序列為利拉魯肽序列中的第1-8位氨基酸，
第二肽片段序列為利拉魯肽序列中的第9-16位氨基酸，
第三肽片段序列為利拉魯肽序列中的第17-26位氨基酸，
第四肽片段序列為利拉魯肽序列中的第27-31位氨基酸；
所述的方法包括以下步驟：
(1)分別固相合成側(cè)鏈保護(hù)的第一～第四肽片段序列，并從樹(shù)脂上裂解；
(2)將側(cè)鏈保護(hù)的第四肽片段序列羧基端修飾保護(hù)，并脫去其氨基保護(hù)基；
(3)將脫去氨基保護(hù)基的側(cè)鏈保護(hù)的第四肽片段序列和側(cè)鏈保護(hù)的第三肽片段序列偶聯(lián)得到側(cè)鏈保護(hù)的第五肽片段序列，并脫去其氨基保護(hù)基；
(4)將脫去氨基保護(hù)基的側(cè)鏈保護(hù)的第五肽片段序列和側(cè)鏈保護(hù)的第二肽片段序列偶聯(lián)得到側(cè)鏈保護(hù)的第六肽片段序列，并脫去其氨基保護(hù)基；
(5)將脫去氨基保護(hù)基的側(cè)鏈保護(hù)的第六肽片段序列和側(cè)鏈保護(hù)的第一肽片段序列偶聯(lián)得到全保護(hù)的利拉魯肽直鏈多肽；
(6)將全保護(hù)的利拉魯肽直鏈多肽脫去第20位Lys的側(cè)鏈保護(hù)，并完成修飾得到全保護(hù)利拉魯肽；
(7)將全保護(hù)的利拉魯肽裂解脫除保護(hù)基得到利拉魯肽粗肽；
(8)利拉魯肽粗肽經(jīng)純化換鹽得到利拉魯肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的片段縮合制備利拉魯肽的方法，其特征在于，步驟(1)中，側(cè)鏈保護(hù)的第一至第四肽片段序列分別由氨基酸依次偶聯(lián)在固相載體上獲得；其中，所述的固相載體為酸敏感樹(shù)脂；
側(cè)鏈保護(hù)的第一至第四肽片段序列固相合成中，所使用的氨基脫保護(hù)試劑為體積百分含量為20％的哌啶的DMF溶液、或者體積百分含量為1％的DBU的DMF溶液；所使用的偶聯(lián)劑為DIC與HOBt的組合、或者HBTU與HOBt與DIEA的組合、或者PyBOP與HOBt與DIEA的組合；所使用的裂解劑為體積百分含量為0.5～1％的TFA的DCM溶液、體積百分含量為20％的TFE的DCM溶液、或者TFE與AcOH與DCM按照體積比1∶2∶7的混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的片段縮合制備利拉魯肽的方法，其特征在于，步驟(2)中，所使用的羧基端保護(hù)試劑為0.5M的2Cl-Trt Cl的DCM溶液或者CHCl3與TFE與TBTA按照體積比7∶2∶1的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的片段縮合制備利拉魯肽的方法，其特征在于，步驟(2)、(3)、(4)中，所使用的氨基脫保護(hù)試劑為體積百分含量為16％的哌啶的DMF溶液，或者體積百分含量為1％的DBU的DMF溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的片段縮合制備利拉魯肽的方法，其特征在于，步驟(3)、(4)、(5)中，所使用的偶聯(lián)劑為HBTU與HOBt與DIEA的組合、或者HBTU與HOAt與DIEA的組合、或者DIC與HOBt的組合、或者EDC與HOBt的組合、或者PyBOP與HOBt與DIEA的組合；偶聯(lián)反應(yīng)的溶劑為DMF、DCM、NMP、THF、TFE和DMSO中的任意一種或幾種的組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的片段縮合制備利拉魯肽的方法，其特征在于，步驟(6)中，脫去Lys側(cè)鏈保護(hù)ivDde的試劑為水合肼與DMF按照體積比1∶15的混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的片段縮合制備利拉魯肽的方法，其特征在于，步驟(6)中，Lys側(cè)鏈修飾的方法為先加入Fmoc-Glu-OtBu縮合；然后脫去Fmoc基團(tuán)，所用試劑為體積百分含量為16％的哌啶的DMF溶液，或者體積百分含量為1％的DBU的DMF溶液；最后再與棕櫚酸縮合。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的片段縮合制備利拉魯肽的方法，其特征在于，步驟(7)中，全保護(hù)利拉魯肽裂解的裂解液為TFA與H2O按體積比95∶5的混合溶液、或者TFA與EDT與TIS與PhOH與H2O按體積比80∶5∶5∶5∶5的混合溶液、或者TFA與EDT與TIS與H2O按體積比92.5∶2.5∶2.5∶2.5的混合溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的片段縮合制備利拉魯肽的方法，其特征在于，步驟(8)中，純化為反相高效液相色譜純化換鹽；流動(dòng)相為醋酸水溶液和乙腈溶液。
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