[發明專利]MGMT基因啟動子甲基化檢測試劑和方法在審
| 申請號： | 201510074978.7 | 申請日： | 2015-02-12 |
| 公開（公告）號： | CN104726561A | 公開（公告）日： | 2015-06-24 |
| 發明（設計）人： | 陳奕磊;林筱劍;王淑一 | 申請（專利權）人： | 福州艾迪康醫學檢驗所有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 杭州金道專利代理有限公司 33246 | 代理人： | 黎雙華 |
| 地址： | 350008 福建*** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | mgmt 基因 啟動子 甲基化 檢測 試劑 方法 | ||
1.MGMT基因啟動子甲基化檢測試劑，其特征在于，包括特異性擴增引物SEQ?NO?1和SEQ?NO?2，其中SEQ?NO2的5端標記生物素，以及測序引物SEQ?NO?3，其堿基序列如下所示：
SEQ?NO?1：5’-?GYGTTTYGGATATGTTGG?-3’；
SEQ?NO?2：5’-?CRAAACRACCCAAACACTCAC?-3’；
SEQ?NO?3：5’-GATAGTTYGYGTTTTTAGAA-3’。
2.如權利要求1所述的試劑，其特征在于，特異性擴增引物包括第一輪PCR擴增引物SEQ?NO?1和SEQ?NO?2和第二輪PCR擴增引物SEQ?NO?1和SEQ?NO?2。
3.如權利要求1所述的試劑，其特征在于，SEQ?NO?1:SEQ?NO?2的使用濃度之比為0.25uM:0.35uM。
4.檢測MGMT基因啟動子甲基化的方法包括：
（i）提取樣本中的DNA；
（ii）將模板DNA進行亞硫酸鹽處理，并純化回收；
（iii）以步驟（ii）中的純化回收產物為模板，依據所述的特異性擴增引物（SEQ?NO1、SEQ?NO?2）進行兩輪PCR擴增；
（iiii）將PCR產物進行單鏈純化之后，將其置于焦磷酸測序儀中測序；
（iiiii）依據相關軟件獲得樣本的MGMT啟動子甲基化狀態。
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟（iii）中所述的第一輪擴增條件為：95℃?15min預變性；94℃?30s，48℃?30s，72℃?1min?，49個循環，72℃?10min；所述的第二輪擴增循環數設為38個，其余反應條件不變。
6.如權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟（iiiii）以亞硫酸鹽處理后的MGMT啟動子序列為標準序列，并將其輸入甲基化檢測軟件PyroMark?CpG，通過該軟件分析獲得樣本的MGMT啟動子甲基化狀態。
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