[發(fā)明專利]一種真菌菌絲體的培養(yǎng)收集方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510073941.2
• 申請日: 2015-02-11
• 公開（公告）號(hào): CN104611239A
• 公開（公告）日: 2015-05-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃龍花;譚武平;胡惠萍;黃志勇;鐘元茂;劉遠(yuǎn)超;曹仁潤;李銓
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東省微生物研究所;廣東粵微食用菌技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 廣州弘邦專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44236
• 代理人: 張釔斌

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物領(lǐng)域，涉及一種真菌菌絲體的培養(yǎng)收集方法。

背景技術(shù)

研究人員在進(jìn)行真菌菌絲體的總DNA、RNA和蛋白質(zhì)的提取或真菌發(fā)酵配方、參數(shù)探索等研究中，需要對(duì)菌絲體進(jìn)行培養(yǎng)增殖。目前，對(duì)菌絲體進(jìn)行培養(yǎng)增殖常采用液體發(fā)酵培養(yǎng)然后將菌絲體從發(fā)酵液中分離出來，或者直接用試管斜面或平板等固體培養(yǎng)基進(jìn)行養(yǎng)菌后刮取表面菌絲體的方法。

目前，對(duì)于液體培養(yǎng)的菌絲體多采用高速離心法和過濾法將菌絲體從發(fā)酵液中分離出來。然而，這兩種分離方法都存在一定的問題。對(duì)于高速離心法，一方面，由于某些真菌菌種液體培養(yǎng)的菌絲體較為粘稠，成懸浮液大顆粒狀態(tài)，因此，即使采用很高的離心速度，也難以將菌絲體完全緊湊地沉降到離心管底部，分離效果差；而另一方面，菌絲球顆粒內(nèi)部的水分也難以通過離心去除，并且還存在離心機(jī)成本高、操作繁瑣耗時(shí)等問題。對(duì)于過濾法，目前包括采用濾紙進(jìn)行真空抽濾的方法和普通紗布過濾法，對(duì)于濾紙真空抽濾法，一方面，同樣存在由于某些真菌菌種發(fā)酵液的濃度高且粘稠，很難得到較干燥的菌絲的問題，另一方面，對(duì)于這樣的發(fā)酵液，濾紙微孔極易被發(fā)酵液堵住，因此，后續(xù)難以過濾下去，必須不斷更換濾紙，而由于濾紙濕后容易被刮破，因此吸附在濾紙上的菌絲體也較難完整取下來；對(duì)于紗布過濾法，由于紗布易沾菌絲，因此，在樣品數(shù)量多的情況下易造成不同樣品間的菌絲交叉污染，不可重復(fù)利用，從而造成不必要的浪費(fèi)，并且在采用紗布過濾時(shí)，紗布層數(shù)少則菌絲容易漏出，層數(shù)多則每層紗布間及紗布孔中容易殘留菌絲，易造成樣品的浪費(fèi)和數(shù)據(jù)的誤差。

而對(duì)于試管斜面或平板等固體培養(yǎng)菌絲體后刮取表面菌絲體的方法，一方面菌絲量太小難以滿足實(shí)驗(yàn)需求，另一方面，刮取菌絲體過程中難免帶入固體培養(yǎng)基，不僅操作麻煩繁瑣，而且影響后續(xù)分子生物實(shí)驗(yàn)的開展及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)以上不足，本發(fā)明提供一種簡單快捷的真菌菌絲體培養(yǎng)和收集方法，不僅使得菌絲體的收集方便簡單，而且所收集菌絲體純凈無雜，適于分子生物學(xué)研究。

本發(fā)明通過以下方案達(dá)到上述目的：

一種真菌菌絲體的培養(yǎng)收集方法，將玻璃紙平鋪在真菌生長的培養(yǎng)基上，將真菌菌種塊無菌接種至玻璃紙上，待菌絲體長滿培養(yǎng)基后收集真菌菌絲體。

優(yōu)選的，待菌絲體長滿培養(yǎng)基后，將玻璃紙與培養(yǎng)基分離，收集玻璃紙上的菌絲體。

進(jìn)一步優(yōu)選的，將玻璃紙與培養(yǎng)基分離后，刮取玻璃紙上的菌絲體收集得到菌絲體。

優(yōu)選的，所述真菌菌種塊接種大小在(0.5±0.2)cm*(0.5±0.2)cm之間。

優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基為培養(yǎng)基平板。

優(yōu)選的，所述菌絲體用于總DNA、RNA、或蛋白質(zhì)的提取。

玻璃紙(Cellophane，)又稱賽璐玢，是一種透明度高并有光澤的再生纖維素薄膜，對(duì)商品的保鮮和保存活性十分有利，因此玻璃紙目前常被用作商品包裝。

申請人意外發(fā)現(xiàn)，在真菌菌絲培養(yǎng)時(shí)，特別是利用真菌菌種塊接種時(shí)，將玻璃紙用作隔離膜，其透氣性能使真菌種塊能透過它吸收到培養(yǎng)基的營養(yǎng)而正常生長，而玻璃紙的透明度不僅便于觀察菌絲體外觀；而且能將菌絲體與培養(yǎng)基物理隔離開，便于菌絲體的收集且不帶入雜質(zhì)。經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)證明，該培養(yǎng)收集方法收集得到的菌絲體，適合于后續(xù)用于總DNA、RNA、或蛋白質(zhì)提取等分子生物學(xué)研究。該培養(yǎng)收集方法操作簡單，周期短，污染率低，獲得的菌絲體純凈無雜質(zhì)，且玻璃紙具有很強(qiáng)的易分解性，成本低且不會(huì)造成環(huán)境污染，值得大規(guī)模推廣利用。

附圖說明

圖1是實(shí)施例4的ITS-PCR產(chǎn)物的電泳圖。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明。

實(shí)施例1：

一種真菌菌絲體的培養(yǎng)收集方法，將玻璃紙平鋪在真菌生長的培養(yǎng)基平板上，將真菌菌種塊無菌接種至培養(yǎng)基平板上的玻璃紙上，待菌絲體長滿培養(yǎng)基平板后，將玻璃紙取出，收集玻璃紙上的菌絲體。

實(shí)施例2：

一種真菌菌絲體的培養(yǎng)收集方法，將玻璃紙滅菌，準(zhǔn)備適合真菌菌絲體生長的培養(yǎng)基平板，待培養(yǎng)基凝固后，將滅菌后的玻璃紙平鋪在培養(yǎng)基平板上，無菌接入真菌菌種塊，蓋好培養(yǎng)基平板蓋，將接種后的平板置于適合真菌生長的環(huán)境中，期間對(duì)菌絲體生長情況進(jìn)行觀察，如果污染情況則丟棄，直至真菌菌絲體長滿培養(yǎng)基平板后，將玻璃紙從培養(yǎng)基平板上取出，置于新的器皿中，刮取玻璃紙上的菌絲體，得到收集的真菌菌絲體。

實(shí)施例3：

一種真菌菌絲體的培養(yǎng)收集方法：