[發明專利]脂環酸芽孢桿菌金標測試條及其制備方法

無效

• 申請號: 201510067207.5
• 申請日: 2015-02-09
• 公開（公告）號: CN104614531A
• 公開（公告）日: 2015-05-13
• 發明（設計）人: 李儒;連曉雯;張宇霞;杜惠芬;李克生;武星;裴瑞萍;宋海珍
• 申請（專利權）人: 甘肅出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫綜合技術中心
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 李艷華

技術領域

本發明涉及一種金標測試條及其制備方法，尤其涉及脂環酸芽孢桿菌金標測試條及其制備方法。

背景技術

對于脂環酸芽孢桿菌屬的檢測和鑒定主要是常規的傳統檢測方法以及現代檢測方法，通常采用兩種方法相結合來進行檢測和鑒定。傳統方法包括待測菌的形態特征、生長溫度范圍等生理生化特性等，但傳統方法檢測指標多、程序復雜、耗時等缺點致使檢測結果滯后，無法快速指導生產并向生產線反饋信息以采取相應的防范和控制措施。另外，各種推薦的方法不盡相同，結果也存在一定的差異，因此，亟需創建一種既快速又特異性好的檢測方法，為果汁生產廠家提供一種從原料到產品的全程檢測，達到及時指導生產、控制脂環酸芽孢桿菌污染的目的。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種特異性強、靈敏度高、操作簡便的脂環酸芽孢桿菌金標測試條。

本發明所要解決的另一個技術問題是提供該脂環酸芽孢桿菌金標測試條的制備方法。

為解決上述問題，本發明所述的脂環酸芽孢桿菌金標測試條，包括襯板，其特征在于：所述襯板上附有雙面膠層，其一端設有手持端吸水層，其另一端設有測試端吸水層；所述手持端吸水層與所述測試端吸水層之間的所述襯板上依次設有檢測層、抗脂環酸芽孢桿菌金標抗體層；所述檢測層的一端與所述手持端吸水層相粘附，其另一端則與所述抗脂環酸芽孢桿菌金標抗體層相粘附，該抗脂環酸芽孢桿菌金標抗體層與所述測試端吸水層相粘附；所述檢測層上沿樣品流動方向依次設有檢測線、控制線；所述手持端吸水層與所述測試端吸水層上均設有單面膠保護層。

所述手持端吸水層由多層濾紙制成。

所述測試端吸水層由無紡布制成。

所述檢測線為以線形包被純化的抗脂環酸芽孢桿菌單抗。

所述抗脂環酸芽孢桿菌單抗是通過下述步驟制得：采用常規技術將來自于脂環酸芽孢桿菌模式菌株ATCC?49025免疫接種Balb/C小鼠的脾臟細胞和骨髓瘤細胞融合，選擇產生所需抗脂環酸芽孢桿菌單克隆抗體的雜交瘤細胞；再將雜交瘤細胞克隆得單克隆抗體。

所述控制線為以線形包被純化的羊抗鼠IgG抗體。

所述檢測層由纖維素膜制成。

如上所述的脂環酸芽孢桿菌金標測試條的制備方法，包括以下步驟：

⑴制備膠體金：

在質量濃度為0.01~0.03%的氯金酸中加入其體積0.8~1%且濃度為1%的檸檬酸三鈉，煮沸10~20分鐘，還原制成15~50納米的膠體金溶液；

⑵制備抗脂環酸芽孢桿菌膠體金溶液：

在100ml所述膠體金溶液中加入2~10mg抗脂環酸芽孢桿菌抗體，混合均勻后以2000轉/分的速率離心10min，得到上清液，該上清液再以10000轉/分的速率離心1h，得到沉淀物；將1000ml所述沉淀物溶于4~10ml??0.02M、pH=7.4的Tris-HCl液中，得到含0.1~0.6%動物血清白蛋白、0.02%疊氮鈉的抗脂環酸芽孢桿菌抗體的膠體金溶液；所述抗脂環酸芽孢桿菌抗體是指抗脂環酸芽孢桿菌單抗；

⑶將所述抗脂環酸芽孢桿菌膠體金溶液浸著無紡布，浸入量以浸入液體開始向外流出為止，然后在37℃下干燥至恒重，即得抗脂環酸芽孢桿菌金標抗體層；

⑷制備檢測層：

將濃度為1~2mg/ml的抗脂環酸芽孢桿菌單抗和濃度為1~2mg/ml的羊抗鼠IgG抗體噴在纖維素膜上形成檢測線和控制線，最后在37℃下干燥至恒重，即得檢測層；

⑸在附有雙面膠層的塑料制成的襯板的中段粘貼所述檢測層，該襯板的兩端分別黏貼多層濾紙制成的手持端吸水層和無紡布制成的測試端吸水層；然后在所述測試端吸水層與所述檢測層之間夾貼所述抗脂環酸芽孢桿菌金標抗體層，其中該抗脂環酸芽孢桿菌金標抗體層的4/5部分夾在所述測試端吸水層，1/5部分壓在所述檢測層上；最后，在所述手持端吸水層和所述測試端吸水層上附上單面膠保護層，即得。

本發明與現有技術相比具有以下優點：

1、本發明是以脂環酸芽孢桿菌屬的模式菌株ATCC?49025單克隆抗體為基礎，采用免疫層析技術和膠體金顯色原理設計而成的試紙條，其制備方法簡單、成本低廉，穩定性、重復性好，使用時，快捷迅速、安全簡便。

2、本發明與其他技術相比，檢測成本較低，檢測周期短，操作人員只需簡單培訓即可掌握檢測要領，結果判定在3~15分鐘內完成，無需特殊儀器和實驗條件，這對于提高企業對該菌的檢測水平和縮短檢測時間具有很強的實用價值。