[發明專利]一種將hpaXm基因轉入短短芽孢桿菌HAB-5的化學轉化方法

在審

• 申請號: 201510065811.4
• 申請日: 2015-02-09
• 公開（公告）號: CN104630276A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發明（設計）人: 繆衛國;汪惠;劉文波;政服叢
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: C12N15/87
• 分類號: C12N15/87;C12N15/31;C12R1/01
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司44218
• 代理人: 徐慶蓮

1.一種將基因hpa_Xm轉入短短芽孢桿菌HAB-5的化學轉化方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將短短芽孢桿菌HAB-5在LB平板上活化，挑取單菌落接種于LB液體培養基中培養得短短芽孢桿菌HAB-5菌液；

（2）轉接經步驟（1）培養的HAB-5菌液到MD培養基中培養；

（3）離心后倒去上清液剩余懸浮菌體，即得HAB-5懸浮菌體溶液；

HAB-5懸浮菌體溶液加入hpa_Xm得混合菌液，200-250rpm振蕩培養；

加入混合菌液體積10倍的LB，200-250rpm振蕩恢復培養；

（6）離心后除去上清液，即得含有hpa_Xm基因的HAB-5。

2.?根據權利要求1所述的所述的一種將基因hpa_Xm轉入短短芽孢桿菌HAB-5的化學轉化方法，其特征在于：所述步驟（1）培養條件為，27-29℃振蕩160-180rpm培養12-16個小時。

3.?根據權利要求1所述的所述的一種將基因hpa_Xm轉入短短芽孢桿菌HAB-5的化學轉化方法，其特征在于：所述步驟（2）培養條件為，27-29℃振蕩160-180rpm培養3-5?h。

4.?根據權利要求1所述的所述的一種將基因hpa_Xm轉入短短芽孢桿菌HAB-5的化學轉化方法，其特征在于：所述步驟（2）中MD培養基每10?mL中含有以下組分：10×PC緩沖液0.92mL，50％葡萄糖0.1mL（115℃滅菌30min），5mg/mL-色氨酸0.1mL，2.2mg/mL檸檬酸鐵銨0.005?mL，0.5mol/L天門冬氨酸鉀0.24?mL，1mol/L硫酸鎂0.03?mL。

5.?根據權利要求4所述的所述的一種將基因hpa_Xm轉入短短芽孢桿菌HAB-5的化學轉化方法，其特征在于：所述的10×PC緩沖液各組分的摩爾濃度為：磷酸二氫鉀44mmol/L，磷酸氫二鉀60mmol/L，檸檬酸三鈉30mmol/L。

6.?根據權利要求1所述的所述的一種將基因hpa_Xm轉入短短芽孢桿菌HAB-5的化學轉化方法，其特征在于：所述步驟（3）中離心條件為，8000-10000?rpm，離心8-12min；

根據權利要求1所述的所述的一種將基因hpa_Xm轉入短短芽孢桿菌HAB-5的化學轉化方法，其特征在于：所述步驟（4）中hpa_Xm的加入量為每毫升懸浮菌體溶液加入0.5-0.8?ug的hpa_Xm；振蕩培養條件為溫度27-29℃、培養2-3h；

根據權利要求1所述的所述的一種將基因hpa_Xm轉入短短芽孢桿菌HAB-5的化學轉化方法，其特征在于：所述步驟（5）中恢復培養過程中，控制溫度27-29℃，培養培養時間為2-3?h；

根據權利要求1所述的所述的一種將基因hpa_Xm轉入短短芽孢桿菌HAB-5的化學轉化方法，其特征在于：所述步驟（6）離心條件為8000-10000rpm離心10-12min。